mtbe对大鼠中枢神经系统fos蛋白的影响

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1、MTBE对大鼠中枢神经系统Fos蛋白的影响作者：李素云，贺性鹏，熊伟，万炜，邓学良，曾怀才，李程【摘要】目的通过研究甲基叔丁基醚(MTBE)对大鼠中枢神经系统Fos蛋白的影响，探讨MTBE对中枢神经系统急性毒作用部位。方法54只健康成年SD大鼠，体重180～220g，随机分为9组，腹腔注射MTBE原液染毒，以未染毒为对照，染毒剂量分别为700、1050、1400mg/（kg·bethyltertiarybutylether(MTBE)ontheFOSprotEinincentralnervoussystemoftherat

2、s.Methods54SDhealthyadult-ratslydividedinto9groupsandinalMTBEinjection.TheMTBEexposuredosagesg/(kg·bmunohistochemicalmethodined.Thecontrolgroupalsaline.ResultsLessFosproteinexpressionusandcerebellarcortexneuronsoreclearthanthosethalamusandhypothalamus.TheFosexpres

3、sionineachsitesinishingleveluscanbeinducedbyMTBE,theacutetoxictargetsitesofMTBEarecerebralcortex,cerebellarcortexandhypothalamus.　　Keyethyltertiarybutylether;Fosprotein;centralnervoussystem;animalexperiments,rats甲基叔丁基醚（MethylTertiaryButylEther,MTBE）作为无铅汽油添加剂，可提高汽油

4、燃烧率，增加辛烷值，减少机动车辆尾气CO及其它有害物的排放，并替代四乙基铅作为汽油抗爆剂［1］。目前国内外的研究结果显示，MTBE可对实验动物和人群的不同组织、器官和系统具有一定的毒作用［2,3］。实验动物研究和人群调查显示［4］，MTBE对中枢神经系统具有明显抑制毒作用，但其毒作用机制和中枢神经靶部位尚不清楚。本实验通过MTBE急性染毒，应用免疫组织化学方法检测脑组织各部位中Fos蛋白的表达，研究MTBE对脑组织的急性毒作用损伤部位，为进一步探讨MTBE对中枢神经系统脑组织急性毒作用机制提供实验依据。　　1材料与方法　　

5、1.1试剂与仪器　　MTBE(湖南长岭炼油厂)，纯度为98.7%。Ⅰ抗为兔抗鼠FosIgG多克隆抗体（1∶500）(美国Sigma公司生产)。Ⅱ抗为生物化羊抗兔（1∶200）（北京中山生物有限公司生产）。生物素—卵白素—辣根过氧化物酶复合物ABC液（1∶200）（美国Sigma公司生产）。小牛血清（北京中山生物有限公司产品）。Motic5000型荧光显微镜（美国Moticpany产品）。图像分析系统(moticimagesadvanced3.2，美国Moticpany生产)。恒低温切片机(Therdoelectronpan

6、y产品)。SD大鼠（中南大学实验动物部生产）。　　1.2动物中毒模型的建立　　成年SD大鼠54只，体重180～220g，随机分为9组，每组6只，雌雄各半。MTBE染毒途径为腹腔注射原液，MTBE染毒分三个剂量组，各组剂量分别为700、1050、1400mg/（kg·bg/（kg·bg/（kg·bl/（50g·bl灌注，待右心耳流出的液体变清亮时，再用4℃预冷的质量分数为4%的多聚甲醛磷酸缓冲液（0.1mol/LPBS，pH＝7.4）150～200ml灌注，一般灌注时间不少于30min。灌注完成后，取出脑组织标本，在4℃预冷

7、的质量分数4%的0.1mol/LPBS(pH=7.4)中固定2～4h后，分别置于质量分数为15%和30%的蔗糖（0.1mol/LPBS配制）梯度溶液中直至标本下沉。取大、小脑冰冻切片机作连续冠状切片，片厚30μm，0.01mol/LPBS6孔反应板接片。　　1.4免疫组织化学法（ABC法）　　取切片（隔5张取1张）冲洗，所有切片冲洗均用0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)冲洗5min，3次；室温下3%H2O2浸泡30min，以灭活内源性过氧化物酶，冲洗；0.3%Tritonx-100浸泡30min，冲洗；5%羊血

8、清室温下封闭1h；1∶500Fos兔抗鼠多克隆抗体4℃冰箱反应72h，每天取出在室温下摇床中摇动20min，冲洗；1∶200生物素化羊抗兔室温孵育2.5h，冲洗；滴加1∶200ABC复合物（提前半小时配制），室温孵育2h，冲洗；滴加0.05%二氨基联苯胺和0.03%H2O2显色5min；0.01mol/