彩图骨髓干细胞体外组织工程软骨形成的实验研究

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1、彩图骨髓干细胞体外组织工程软骨形成的实验研究.L.编辑。作者：宋世锋，肖海涛，武伟，袁素，谢瑶云，吴多能，白殿卿【摘要】[目的]探讨骨髓干细胞(BMSCs)在体外不同载体中软骨形成的能力和可行性。[方法]分离培养猪BMSCs，将第3代BMSCs以载体内多点注射和表面点滴法植于A组：Ⅱ型纤维胶原蛋白海绵(fibrincollagensponge)，B组：生物蛋白海绵(fibrincollagenspongeandbFGF);C组：明胶海绵(gelatinsponge)3种载体上，于4周取材进行组织学分析。[结果]纤维胶原蛋白海绵和生物蛋白海绵组均有软骨细胞形成

2、，明胶海绵无细胞生长。利用SPSS10.0软件统计学处理，显示B组软骨细胞阳性数量(92.75±10.57)多于A组(36.45±8.34)，有统计学差异(P<0.01)，两组都明显多于C组(0)，有统计学差异(P<0.01)。[结论]MSCs经分离扩增后种植于三维立体结构的纤维蛋白海绵载体上，在含有TGFβ1培养液中形成软骨;在TGFβ1和FGF的双重因子培养中，其软骨的形成能力明显增加。【关键词】骨髓基质细胞;载体;软骨形成;组织工程　　Abstract：[Objective]Toinvestigatethechondrogenicabi

3、lityandfeasibilityofbonemesenchymalstemcells(BMSCs)inthreekindsofcellularcarrier.[Method]BMSCsultipointinjectionintoanddroppingonthesurfaceofcarriers(fibrincollagensponge,groupA;fibrincollagenspongeandFGF,groupBandgelatinsponge,groupC).AllsamplesuchmorechondrogeniccellsingroupB,an

4、dnocellsingroupC.Accordingtoanalysisorecartilagecells(92.75±10.57)ingroupBthaningroupA(36.45±8.34).Itedtochondrogenesisafteraugmentedandcultivatedinthethreedimensionalfibrincollagenspongeediumofcontainedtransforminggroesenchymalstemcells;cellularcarrier;chondrogenesis;tissueengine

5、ering　　骨髓干系胞(bonemarroalcells，BMSCs)也称骨髓的间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)，BMSCs的提取分离及传代培养技术已逐渐成熟。如何将BMSCs种植于载体上进行体外人工培养形成软骨样组织还是在探讨中的问题。本研究旨在探讨BMSCs能否在体外几种载体中提供软骨诱导微环境，促进BMSCs向软骨分化并形成组织工程软骨。　　1材料与方法　　1.1细胞培养　　BMSCs培养：抽取8周龄幼猪髂骨骨髓5ml，用密度梯度离心法分离出有核细胞，再以PBS缓冲液(Gibco公司，美国)和无血清DMEM

6、(Gibco公司，美国)各离心洗涤1次。制备含有0.05u/ml青霉素、0.05μg/ml链霉素(Gibco公司，美国)、TGFβ1(Sigma公司，美国)的浓度为5ng/ml、10%胎牛血清(Hyclone公司，美国)的DMEM培养液。计数有核细胞，以6×105个/cm2的密度接种于培养皿(Gibco公司，美国)，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下培养，贴壁法分离BMSCs接种3d后首次换液。待细胞生长达到80%～90%融合后，用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化，以1.5×104个/cm2的密度接种，常规传代扩增，第3代细胞用于实验。　　

7、1.2载体制作、细胞种植及分析方法　　将无菌胶原蛋白海绵(fibrincollagensponge，Sigma公司，美国)、生物蛋白海绵(fibrincollagensponge+b-FGF，辽宁绿谷制药)、明胶海绵(gelatinsponge南京金陵制药)在无菌条件下裁剪成5mm×5mm×5mm方块状。A组：胶原蛋白海绵;B组：生物蛋白海绵;C组：明胶海绵。三组分别取16个标本，将第3代细胞按5×107个/cm2的密度分别以载体内多点注射和表面点滴法接种到材料上，每块材料接种细胞悬液300μl。在37℃、5%CO2、100%饱和湿度下加含TGFβ1(5n

8、g/ml，)的DMEM培养液，每隔2d换液1次，观察