皮肤鳞状细胞癌组织和细胞系中ptch1及gli1表达的检测论文

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1、皮肤鳞状细胞癌组织和细胞系中Ptch1及Gli1表达的检测论文白育萍，刘海燕，高滢，刘玉峰，李承新【摘要】目的：探讨Hedgehog信号传导通路中Ptch1和Gli1在鳞状细胞癌皮损和细胞系中的表达及意义.方法：采用免疫组化技术分别检测鳞状细胞癌皮损和细胞系A431,HSQ89,HSC2和Tca中Ptch1和Gli1的蛋白水平表达与分布.结果：Ptch1及Gli1在正常皮肤，鳞状细胞癌皮损，细胞系A431，HSQ89以及HSC2细胞中均有阳性表达.freelouscellcarcinomalesionsandt

2、hecelllines.METHODS:ImmunohistochemicaltechniquesployedtodetectthedistributionandexpressionsofPtch1andGli1insquamouscellcarcinomalesionsandA431,HSQ89,HSC2andTcasquamouscellcarcinomacelllines.RESULTS:Thereouscellcarcinomalesions,normaltissueandinA431,HSQ89andHSC2sq

3、uamouscellcarcinomacelllines,andtheyainlydistributedinthecellmembraneandcytoplasma.CONCLUSION:ExpressionsofPtch1andGli1mightcontributetoformationandprogressionofsquamouscellcarcinomaviaactivatingHedgehogsignalingpathmunohistochemistry;carcinoma,squamouscell0引言皮肤鳞状细胞癌

4、（squamouscellcarcinoma,SCC）是皮肤科临床上常见的表皮肿瘤之一,近年来其发病率明显上升.虽然SCC的发生与基因突变及烃类化学物质的接触等因素相关［1］,但迄今为止,.freelpus公司）；Ptch1和Gli1抗体(美国SantaCruz公司)，两种抗体的工作浓度均为1∶200.免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒（北京中杉公司）.1.2方法免疫组化采用ABC法,石蜡切片脱蜡,梯度乙醇至水,PBS洗3次，30mL/LH2O2甲醇室温浸泡5～10min，枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原微波加热修复60min

5、,冷却至室温后用1∶50的正常马血清室温孵育20min,加20mL/LBSA稀释至1∶200的一抗Gli1和Ptch1置于湿盒内，4℃冰箱孵育过夜（12h）.分别加20mL/LBSA稀释至1∶200生物素标记的抗山羊和抗兔二抗,37℃孵育30min,DAB显色,显微镜下观察,适时终止反应,苏木精复染15～30s，脱水、透明、封片后，光镜下观察，每组实验均以已知阳性切片（基底细胞癌）作阳性对照,分别以PBS溶液代替一抗做阴性对照.将Tca，A431，HSQ89和HSC2细胞以5×104/孔接种在铺有载玻片的培养皿中,37℃在CO

6、2孵箱中培养过夜，分别用含0.5mL/L新生小牛血清的DMEM(Tca)，高糖DMEM(A431，HSQ89，HSC2)同步化2d,用冷丙酮固定细胞15min,PBS洗涤5min×3次，空气中自然晾干；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min；30mL/LH2O2甲醇室温孵育5～10min,以消除内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗2min共3次；50～100mL/L正常山羊血清封闭，室温孵育10min.倾去血清，勿洗，加20mL/LBSA稀释至1∶200的一抗Gli1和Ptch1置于湿盒内，4℃过夜；PBS冲洗2min共3次；滴加1∶

7、50稀释的生物素标记的二抗，37℃孵育30min；PBS冲洗2min共3次.显色剂显色（DAB）,自来水充分冲洗，复染、脱水、透明、封片.用PBS代替一抗做阴性对照，用已知阳性片做阳性对照.免疫组化结果SCC细胞胞质或胞膜着棕黄色为阳性.随机选取4个非连续的高倍镜视野计数，评分标准按染色强度及阳性细胞数来计算评分［1］：①染色强度：0为阴性，1为弱阳性，2为阳性，3为强阳性；②阳性细胞计数：0为无阳性细胞，1为阳性细胞数＜10％，2为阳性细胞数10％～50％，3为阳性细胞数＞50％.①＋②之和为最后得分，得3～6分者为免疫组化染色阳性

8、.统计学处理:采用SPSS13.3统计软件处理进行χ2验检,P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1Gli1和Ptch1在SCC组织中的表达正常皮肤组织中Gli1阴性14例，阳性1例，4例基底细胞癌均阳性.皮肤组