应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性

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1、应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性查艳景刘莉（曲靖医学高等专科学校云南曲靖655000）【中图分类号】R114【文献标识码】B【文章编号】1672—3783（2015）06-0201-01【摘要1木文应用蚕豆根尖微核检测茶的遗传毒性方面作了一些研宄。以不同品种（绿茶I、绿茶II、红茶、普洱生茶、普洱熟茶）不同泡数（洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤）的茶汤处理为实验组，蚕豆根尖细胞微核率的大小表示茶叶遗传毒性的大小。实验表明，茶汤具有一定的遗传毒性。同一品种不同泡数的茶汤处理后，微核率不同（洗茶汤〉一泡茶汤〉二泡茶汤）。绿茶I的遗传毒性低于绿荼II的遗传毒

2、性，且差异性显著（P=0.03775，P<0.05），普洱生荼与普洱熟荼的遗传毒性相当，差异性不显著（P=0.225403,P>0.05）o【关键词1微核试验；微核率；污染指数；农药残留；遗传毒性一、研究目的与意义近代科学研宄表明，茶叶中含有丰富的营养成份以及多种对人体健康有益的物质，这些营养成分是人体正常生长发育所必须的，并可以帮组人体预防和治疗某些疾病，如荼中含有大量的维生素C可降低胆固醇值，茶叶可预防糖尿病。市场上有许多茶产品，如佳洁士茶爽牙膏、茶多酚片、绿茶洁面乳等。茶叶是日常生活的必需品，也是我国重要的传统出口商品，但随着人们牛.活水平的提高，对食

3、品安全问题越来越重视，茶叶中农药残留问题已经成为国际贸易中的技术焦点，各国都制定了茶叶中的农药残留限量标准，检测项目不断增加，要求日趋严格。我国茶叶出口屡遭农药残留超标困扰，农药残留超标问题己经成为我国茶叶出口的一道关卡。实验材料与方法2.1实验材料实验材料：松滋青皮豆。茶叶的品种：绿茶I，绿茶II，红茶，普洱生茶，普洱熟茶，这些茶叶都是2014年的春茶，在市场上随机购买。2.2研宄方法基本按照《水和废水监测分析方法》进行，并做部分改进。2.3实验步骤2.3.1制备蚕豆根尖(1)实验材料的培育购松滋青皮豆种子，晒干贮藏于干燥器内或4°C冰箱内备用。(2)实验

4、材料的选择将蚕豆从4°C的冰箱中取出，在室温(20°C-25°C)下放置48h,选择颗粒饱满、大小均匀、胚芽无损坏、没有被虫食用的蚕豆干种子。(3)浸种催芽将选出的蚕豆放入底部垫洁浄纱布的解剖盘中，在解剖盘中加入适量的蒸馏水，淹没蚕豆的3/4即可，置于室温下培养24h,此间换水3次。种子充分吸胀萌发后，移至解剖盘中覆盖纱布以保持湿度，室温培养。待根长至1-2cm左右时，选择320个初生根尖生长良好、根长一致的蚕豆种子，随机分成16组，每组20个备用。2.3.2处理蚕豆根尖将上述备用蚕豆留下其中1组用蒸馏水培养作对照组，其余15组分别用受试液培养，处理24小吋

5、，每隔8h换一次水。2.4.3蚕豆根尖的恢复培养将经各受试液处理过的根尖，用蒸馏水浸洗3次，每次2—3min,将洗浄的种子再放入底部垫有纱布培养皿中，盖上纱布在室温下保湿恢复培养22.4.4蚕豆根尖的固定与保存将恢复培养后的蚕豆，剪下根尖1cm—1.5cm,用卡诺固定液固定24h。将固定后的蚕豆根尖用90%洒精浸洗半小吋，再用70%的酒精浸洗半小时，然后放入70%的酒精中置于4°C冰箱中保存，酒精的体积约为根尖的15倍。2.4.5解离蚕豆根尖先用蒸馏水浸洗根尖1一2次，然后再用卡诺固定液固定一次，吋间3一5分钟；将固定好的蚕豆根尖用蒸馏水浸洗2次，每次5mi

6、n,若根尖在冰箱中的储存吋间短则不需要再次固定。用1mo1/L盐酸于50°C水浴箱中解离根尖5min，再用蒸馏水浸洗2次，每次5min。2.4.6徒手制片取出根尖置于檫浄的载玻片上，用解剖针截取2cm左右根尖分生组织（解离后稍透明部位），用解剖针将其捣碎并均匀的涂开，滴上1一2滴卡宝品红染液，盖上盖玻片，染色5—10min后压片。2.4.7蚕豆根尖的镜检及微核识别标准制备好的装片置于显微镜上观察，每个待测液培养的根尖装片及对照组装片至少分别镜检10个根尖，每个根尖装片在高倍镜下观察10个视野，每个视野中大约100个细胞，每个装片统计约1000个细胞中的微核数

7、，并做记录。微核识别标准：（1）大小为主核的1/3—1/15,且于主核分离；（2）着色与主核相当或稍浅；（3）形态为圆形、椭圆形、不规则形。3实验结果由下图可知，这五种（绿茶I、绿茶II、红茶、普洱熟茶、普洱生茶）茶叶洗茶汤MCN‰都高于各自相对应的一池茶汤的MCN‰，而一泡茶汤又高于相对于的二泡茶汤的MCN‰。红茶洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都高于其它品种对应的MCN‰;绿茶I洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都低于其它品种对应的MCN‰。绿茶I的微核率比绿茶II的微核率低，差异显

8、著（P=0.03775,P<0.05）;普洱熟茶与普