草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究论文

《草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究论文随志刚陈明玉刘志强皮子凤刘忠英【摘要】目的优化草乌中乌头类生物碱提取方法，比较草乌、附子生品及市售炮制品中乌头类生物碱的含量，为相关中药中生物碱的测定和临床应用提供参考。方法分别用7种提取方法提取附子中乌头类生物碱，比较各方法对3种双酯型生物碱的提取效率，并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量。结果10%氨水乙醚冷浸法对3种双酯型生物碱的提取效率最高。炮制品中的乌头类生物碱含量明显低于生药，各种炮制品中乌头类生物碱的含量差别也比较大。结论采用10%氨水乙醚冷浸法，高效液相色谱-紫外光谱（HPLCUV）

2、法对药材中乌头类生物碱进行提取和含量测定，能真实反映药材中药效和毒性成分。不同的炮制品中各生物碱含量差别较大.freeladzu，日本）；超声清洗器（Autoscience,天津）；高速离心机（Eppendorf，德国）；电子天平（Sartorius，德国）。1.2试剂乌头碱，中乌头碱和次乌头碱对照品购自中国药品生物制品检定所。生附子、生草乌购自四川江油，制草乌、黑附片、白附片、盐附子、淡附子购自吉林省长春市吉深药店，经长春中医药大学王淑敏教授鉴定均为正品。甲醇为色谱纯,水为去离子水，乙醚、二氯甲烷等其他试剂为分析纯。2方法与结果2.1方法学考

3、查2.1.1色谱条件AgilentextendedC18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇∶0.1%三乙胺（65∶35）；流速为0.6ml·min-1；检测波长为230nm；柱温为30℃；样品经过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液进样10μl。2.1.2标准曲线精密称取中乌头碱、乌头碱和次乌头碱对照品适量置于容量瓶中，加入二氯甲烷溶解并定容，得浓度为1.08mg·ml-1的中乌头碱、1.12mg·ml-1的乌头碱和1.22mg·ml-1的次乌头碱标准品储备液。每种对照品溶液分别进样2，4，6，8，10μl，高效液相色谱法测定。以

4、浓度（μg·ml-1）对峰面积计算回归曲线。得到中乌头碱标准曲线方程为Y=20672.0X-58377.5，r=0.9995；乌头碱标准曲线方程为Y=18114.2X-28544.2，r=0.9999；次乌头碱的标准曲线方程为Y=186632X-13386.7，r=0.9993。说明乌头碱在5.6～112μg·ml-1、中乌头碱在5.4～108μg·ml-1，次乌头碱在6.1～122μg·ml-1的浓度范围内均呈良好的线性。2.1.3重复性实验同一生草乌粉末按优选的提取方法操作，提取6份溶液，HPLC测定，记录乌头碱、中乌头碱、次乌头碱峰面积。

5、乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的RSD值分别为4.32%，3.57%和4.84%。说明方法重复性较好。2.1.4回收率实验精密称取已知含量的生草乌粉末18份，每份0.2g。第1个6份分别加入0.05mg乌头碱，第2个6份分别加入0.4mg中乌头碱，第3个6份分别加入0.2mg次乌头碱，同法操作计算含量，乌头碱的平均回收率为91.2%，RSD值为2.84%；中乌头碱的平均回收率为90.4%，RSD值为3.12%；次乌头碱的平均回收率为92.8%，RSD值为3.10。表明方法回收率较好。2.1.5稳定性实验同一生草乌粉末样品溶液保存于-80℃冰箱中

6、，于放入冰箱后第4，8，12，18，24小时测定，计算含量。24h内乌头碱、中乌头碱和中乌头碱含量的RSD值分别为5.21%，4.35%和6.24%。表明提取液在-80℃冰箱中24h内较稳定。2.2提取方法的优选2.2.1水提氯仿萃取法称生草乌2.0g于带塞锥形瓶中，加30ml蒸馏水，振荡6h后，转移至50ml离心管中，3000r·min-1离心20min，取上清液，沉淀水洗2次，合并上清液，用10%氨水调pH值为10，分别加入15，5，5ml氯仿萃取3次，合并氯仿层，蒸干。加甲醇溶解，定容至25ml。2.2.2酸提法称生草乌2.0g于带塞锥形

7、瓶中，加30ml0.04%HCl，振荡6h，转移至50ml离心管中，3000r·min-1离心20min，取上清液，沉淀用0.04%HCl洗2次，合并上清液，加0.04%HCl定容至50ml。2.2.3酸提乙醚萃取法称生草乌2.0g于带塞锥形瓶中，加30ml0.04%HCl，振荡6h，转移至50ml离心管中，3000r·min-1离心20min，取上清液，沉淀0.04%HCl洗2次，合并上清液，用10%氨水调pH值为10，加入15，5，5ml乙醚萃取3次，合并乙醚层，蒸干。加甲醇溶解，定容至25ml。2.2.4酸提氯仿萃取法称生草乌2.0g于带

8、塞锥形瓶中，加30ml0.04%HCl，振荡6h，转移至50ml离心管中，3000r·min-1离心20min，取上清液，沉淀用0.04%HCl洗2次