马兜铃的组织培养与植株再生论文

《马兜铃的组织培养与植株再生论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、马兜铃的组织培养与植株再生论文.freelg／L的KT和02mg／L的NAA)后，MS和改良MS培养基均能诱导大量的愈伤组织，而１／２MS培养基则未能诱导；②相同的培养基(改良MS培养基加入01mg／L的KT和02mg／L的NAA)分别置于pH=58、pH=70、pH=80的环境中时，后两者均能诱导大量的愈伤组织.freelg／LKT、05mg/LNAA的培养基。【结论】以MS或改良MS为基本培养基，并在此基础上添加1mg/L的KT和05mg/L的NAA组成诱导愈伤组织的培养基，在pH=70～80的碱性环境下培养，是马兜铃经组织培养能较好地诱导愈伤组织的条件。关键词：马兜铃；中药培育马兜

2、铃为马兜铃科马兜铃属植物，它含一种具有肾毒性的物质马兜铃酸，同时这种物质也存在于许多有药用价值的植物中［１］。如果可以培育出不含马兜铃酸的新型植物，就可以发掘出马兜铃酸类中药的潜在药用价值，而更重要的是可将它作为改造其他有毒中药的模式系统。在基因工程中可以通过基因敲除等技术去除有毒成分的合成基因或改变代谢途径阻止有毒物质的合成［２］。马兜铃的组织培养获得再生植株这一技术为在马兜铃酸类植物中进行基因改造提供必要的技术支持。本文试图探讨马兜铃组织培养诱导愈伤组织的条件。１材料与方法１１植物马兜铃(AristolochiacontortaBunge)来源于广州中医药大学药圃。取马兜铃嫩叶先用香

3、皂水浸泡去污5～7min，然后自来水冲洗干净；在超净工作台上，再用125mol/L的乙醇消毒30s，倒去乙醇，最后用005g/mL的升汞消毒10～18min，用无菌水冲洗8～10次。１２植物激素6糠氨基嘌呤(KT)为上海化学试剂公司产品；腺素(Ad)为上海丽珠东风生物技术有限公司产品；6苄氨基嘌呤(6BA)为新华活性材料研究所产品；α萘乙酸(NAA)为上海曹杨第二中学化工厂产品。１３培养基［３］基本培养基分别为1/2MS、MS和改良MS培养基(其中蔗糖改为20g/L，ＮaＨ２ＰＯ４为170mg/L)，试验中根据具体要求在基本培养基中添加不同的植物激素，pH值为55～80。１４培养愈伤组织

4、的诱导为暗培养，培养温度为(25±1)℃；根以及芽的分化为每天光照16h，光照强度为3000lx(勒克斯)，培养温度为(25±1)℃。２结果２１不同培养基对外植体诱导培养的影响在1/2MS培养基、MS培养基和改良MS培养基中同时分别加入01mg/LKT和02mg/LNAA，结果显示在pH为75的环境下培养10d后，外植体在1/2MS培养基上未能诱导出愈伤组织，而在MS培养基和改良MS培养基上则能诱导出大量愈伤组织(见表1)。２２pH值对外植体诱导培养的影响选用改良MS培养基加01mg/L的细胞分裂素KT和02mg/L的生长激素NAA，马兜铃在酸性环境下诱导出愈伤组织少，而在碱性环境下诱导

5、出愈伤组织多、快(见表2)。２３不同植物激素及其不同组合对外植体诱导培养的影响在改良MS培养基中分别添加不同类型的植物激素，结果显示，单独添加细胞分裂素的培养基上(如6BA、KT、6BA+KT)未能长出愈伤组织，而在单独添加生长激素NAA或同时添加两种激素的培养基上均能长出愈伤组织。说明生长激素在诱导外植体愈伤组织时起着重要的作用。进一步观察在改良MS培养基中分别加入不同种类和不同量的细胞分裂素，结果显示当生长激素用量过多时，出现细胞分裂生长过快，使得愈伤组织变得松散而不利于芽的分化。细胞分裂素用量少时，愈伤组织的诱导率不高，而以在改良MS培养基中添加1mg/L的KT和05mg/L的NA

6、A所诱导的愈伤组织最多(见表3和表4)。２４不同激素组合对芽分化的影响以改良MS培养基分别添加05mg/LKT+002mg/LNAA+2mg/LAd、05mg/LKT+01mg/LNAA+2mg/LAd、1mg/LKT+01mg/LNAA+2mg/LAd均可诱导60%分化芽，而添加1mg/LKT+002mg/LNAA+2mg/LAd时可诱导100%分化芽。结果表明：细胞分裂素KT用量低时，芽的分化效果不理想；生长素用量大时，对芽分化反而有抑制作用。而添加1mg/LKT+002mg/LNAA+2mg/LAd者芽分化效果较理想(见图1)。２５不同激素组合对芽增殖的影响将分化出的芽转移到芽增殖

7、培养基中培养15d，在添加002mg/LNAA、2mg/LAd的改良MS培养基中，当细胞分裂素KT的用量在03～1mg/L时，丛生芽的诱导率为80%～100%，其中以07mg/LKT的诱导率最高；在添加05mg/LNAA、2mg/LAd的改良MS培养基中，当KT用量在3～10mg/L时，丛生芽的诱导率为20%～40%，最大只有40%，长芽培养20d增殖情况见图2。以1／2MS培养基添加02mg/LNAA的芽生根培养情况见图3。表1不