实验二器械的清洗和消毒

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1、实验2器械的清洗与消毒【实验原理】在组织培养过程中，离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。毒性物质包括解体的微生物及细胞残余物以及非营养的化学物质，因此对新采用和重新使用的培养皿等培养用品都要严格清洗和消毒。【实验目的】学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。【仪器、材料及试剂】1．仪器：超净工作台，干燥箱，高压锅，过滤器。2．材料：紫外灯，0.22μm微孔滤膜。3．试剂：75%酒精，0.1%新洁尔灭，高锰酸钾，重铬酸钾，浓硫酸。【操作步骤】1．清洗（1）玻璃器皿的清洗步骤：按浸泡→刷洗→浸酸→冲洗等四步程序进行。①浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性

2、，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡过夜或煮沸30min，水洗。要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用软毛刷、优质洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛刷和优质洗涤剂。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。会严重破坏玻璃器皿的光洁度。特别注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗涤剂冲干净。③浸酸

3、：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污能力很强。经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。④4冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10min，瓶皿需每瓶灌满、倒掉，反复10次以上。然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干备用。对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。【附】清洁液的配制和使用注意事项1.清洁液(配方见表2-1)配方成分弱酸次强液强液重铬酸钾（g）清水（ml）浓硫

4、酸（ml）硫酸浓度（v/v）501000908%100100016014%6020080080%①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。②先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。③缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险(绝不可将重错酸饵液倒入浓硫酸中)。④清洁液配好呈棕红色，待变绿色时表明失效。由于清洁液的腐蚀性极强，配制与应用时必须小心，并做好防护。2．矽酸钠洗液贮存液(×100)砂酸纳80克加偏磷酸钠9克加热溶在1000ml水中。使用时用水稀释100倍，将器皿放入煮沸20min，冷却后冲洗，再用2%HCl浸泡2h后，自来水冲洗。矽酸钠洗

5、液较清洁液安全，但价格较贵。（2）塑料器皿清洗自来水充分浸泡→冲洗→2%Na0H浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次→晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外线照射30min)。凡能耐热的塑料器皿，最好经101.3kPa(121.3℃)高压灭菌。（3）胶塞等橡胶类处理新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→自来水冲洗→2%~5%HCl煮沸15min→自来水冲洗5次以上→蒸馏水冲洗5次以上→蒸馏水煮沸10min，倒掉沸水让余热烘干瓶塞等。或蒸馏水冲洗晾干，整齐摆放于小型金属盒内经101.

6、3kPa高压灭菌。（4）金属器械的清洗4新购进的金属器械常涂有防锈油，先用沾有汽油的纱布擦去油脂，再用水洗净，最后用酒精棉球擦拭，晾干。用过的金属器械应先以清水煮沸消毒，再擦拭干净。使用前以蒸馏水煮沸10min，或包装好以101.3kPa高压15min。（5）除菌滤器的处理用过的滤器将滤膜去除，用三蒸水充分洗净残余液体，置干燥箱中烘干备用。2．包装包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类，前者用于较大

7、瓶皿，一般用硫酸纸和牛皮纸将瓶口包扎好；后者适于较小培养瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等，以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装方法，其它物品可参照处理。①瓶类：硫酸纸罩以瓶口,外罩二层牛皮纸用绳扎紧。②小瓶皿、胶塞、刀剪等器械可装人饭盒，饭盒再以牛皮纸包好，绳扎好。③吸管、滴管口用脱脂棉塞上(不要太紧或太松)装人消毒筒内，滤器、滤瓶、橡皮管等都要用牛皮纸包好瓶口等，外罩一层牛皮纸包好，再用包布包好。④无菌衣、帽、口罩，均以牛皮纸或包布包好，绳扎好。3．消毒灭菌严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、

8、滤过、紫外线及射线等，后