端粒酶在面突外胚间充质细胞干细胞中的表达

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1、端粒酶在面突外胚间充质细胞干细胞中的表达邓蔓菁金岩史俊南董蕊何大为【关键词】外胚间充质干细胞　　Expressionofhumantelomeraseinectomesenchymalstemcellsofearlyembryonicfacialprocess　　【Abstract】AIM:Toevaluatetheactivityoftelomeraseinectomesenchymalstemcellsofearlyembryonicfacialprocess.METHODS:Ectomesenchymalstemcellsofearlyhuma

2、nembryonicfacialprocessentingiainhibitorfactor(LIF).Immunohistochemistryassayandimageanalysisantelomerasereversetranscriptase(hTERT)es.CellsesenchymalstemcellsexpressedhTERT.TheexpressionextentofhTERTdecreasedesofpassages.Thedifferentiatedcellsdidn'texpresshTERT.CONCLUSION:Thou

3、ghectomesenchymalstemcellsofearlyembryonicfacialprocesshavesomeeraseactivity,thetelomeraseactivityatthislevelisnotenoughtopreventcellsfromsenescence.　　【Keyesenchymalstemcell；humantelomerasereversetranscriptase　　【摘要】目的：探讨面突外胚间充质干细胞的端粒酶活性状况.方法：体外培养妊娠50d人胚胎面突外胚间充质干细胞，白血病抑制因子（LIF）抑

4、制细胞分化，于第1,8,15和第22代免疫组化检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达并进行图像分析，同时检测无LIF抑制下，第5代细胞自发分化10d端粒酶逆转录酶的表达情况.结果：外胚间充质干细胞表达端粒酶逆转录酶，表达强度随传代次数的增多而下降.在分化状态，该细胞不再表达端粒酶逆转录酶.结论：早期胚胎面突外胚间充质干细胞具有较高的端粒酶活性，但不足以抑制该细胞的衰老.　　【关键词】外胚间充质干细胞；端粒酶逆转录酶　　0引言　　端粒酶在胚胎干细胞、生殖细胞、永生化细胞及大部分肿瘤细胞中表达，但在正常体细胞中一般不表达.近来发现胎儿组织、正常人的骨髓

5、干细胞等也不同程度地表达端粒酶〔1-3〕.这表明更广泛的组织细胞可能存在端粒酶活性.为了解面突外胚间充质干细胞作为多种终末细胞的来源细胞〔4,5〕，端粒酶是否有活性，表达的端粒酶是否可以阻止衰老的发生，我们通过检测与端粒酶高度相关的端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)的表达，获取面突外胚间充质干细胞端粒酶表达的信息.　　1材料和方法　　1.1材料DMEM（低糖）/F12培养基、胎牛血清(FBS)、非必须氨基酸（NEAA）(Gibco,USA)；白血病抑制因子（leukemiainhibi

6、torfactor，LIF）（Chemicon,USA）；抗HNK1mAb,抗hTERT多抗(SantaCruzBio，USA)；抗波形丝蛋白mAb（Vimentin）,LSAB免疫组化检测试剂盒（DAKO,USA）.　　1.2方法①面突外胚间充质干细胞的培养和鉴定：50d因外伤流产自愿捐赠的胚胎，切取上下颌突，分切为1mm3大小，2.5g・L-1胰酶37℃消化20min，血清中和，吹散，离心.再悬并以1×106接种于100mL培养瓶中，培养液为含100mL・L-1FBS,0.1mol・L-1NEAA的DMEM/F12(1∶1)，并添加1×106U・

7、L-1的白血病抑制因子（LIF），以使细胞保持未分化状态.孵箱内静置50min，约50%细胞贴壁，弃培养液，添加新培养液.间充质细胞贴壁速度较上皮细胞贴壁快，利用其贴壁时间的差异进行初步分离，去除部分上皮细胞.细胞长满90%时，弃培养液，加入2.5g・L-1胰酶.间充质细胞对胰酶的耐受性较差，先脱壁，而上皮细胞脱壁需要的时间较长.将消化下来的细胞置于培养瓶中，1∶2传代，再次利用贴壁时间的差异分离上皮和间充质.最初3代以1∶2传代，并在消化和传代时分离上皮细胞.从第4代开始，以1∶3传代，并不再分离上皮.免疫组化抗HNK1,Vimentin染色阳性鉴

8、定细胞为外胚间充质干细胞；②免疫组化检测及图像分析：细胞传代时，于第1,8,15及第22代制备细胞爬片；同时