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1、高效液相色谱法测定清肝利胆口服液中厚朴酚与和厚朴【摘要】目的:建立测定清肝利胆口服液中厚朴酚、和厚朴酚含量的高效液相色谱法。方法：色谱柱为AgelaPromosilC18(250mm×4.6mm，5μm);流动相为甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30),检测波长为294nm;柱温为35℃;流速为1.0mL·min-1。结果：厚朴酚的线性范围为0.2558～1.535μg，R2=0.9999，平均回收率99.13%,RSD为0.28%;和厚朴酚的线性范围为0.2500～1.500μg，R2=0.9998，平均回收率为99.
2、27%,RSD为0.45%。结论：该法简便快速，重现性好，可作为清肝利胆口服液质量控制的定量方法。【关键词】清肝利胆口服液;厚朴酚;和厚朴酚;高效液相色谱法;含量测定 清肝利胆口服液是由茵陈、金银花、栀子、厚朴、防己5味中药组成的复方制剂，具有清肝利胆湿热的功效。《中国药典》2010版一部收录了该品种[1]，原标准中无厚朴的有效成分厚朴酚、和厚朴酚的含量测定项目，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本实验采用HPLC法测定清肝利胆口服液中厚朴酚、和厚朴酚的含量[2]。 1仪器与试药 仪器岛津高效液相色谱仪LC2010C;
3、Sartorias电子天平(CD225D)。厚朴酚(110729200411)，中国药品生物制品检定所提供;和厚朴酚(110730200609)，中国药品生物制品检定所提供;清肝利胆口服液为市售品;试药甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：AgelaPromosilC18(4.6mm×100mm,5μm);流动相：甲醇乙腈水(50：20：40),检测波长为294nm;柱温为35℃;流速为1.0mL·min-1;进样量20μl。 2.2溶液的制备 2.2.1
4、对照品溶液的制备精密称定经五氧化二磷减压干燥12h的厚朴酚对照品10.23mg与和厚朴酚对照品10.02mg，置200ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每ml含厚朴酚51.15μg，和厚朴酚50.01μg)。 2.2.2供试品溶液的制备取本品10支,混合均匀,精密量取5ml,置10ml容量瓶中,加甲醇稀释到刻度,摇匀,滤过，取续滤液，即得。 2.3标准曲线的绘制 在上述条件色谱下，精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30μL,注入液相色谱仪，测得峰面积。以对照品峰面积为纵座标,以对照品物质的量为横坐
5、标作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y=63031X-1575.2，R2=0.9999，厚朴酚在0.2508～1.504μg范围内有良好线性关系;Y=50728X-3473.4，R2=0.9998，和厚朴酚在0.2500～1.500μg范围内有良好线性关系。 2.4精密度试验 取同供试品溶液溶液,连续进样6次,结果厚朴酚RSD为0.32%(n=6),和厚朴酚RSD为0.25%(n=6)。 2.5稳定性试验 取供试品溶液,间隔4h进样1次,共间隔24h，结果厚朴酚RSD为1.02%(n=7),和厚朴酚RSD为1.23
6、%(n=7)。 2.6重复性试验 取同一批号样品6份，分别按本法处理后进行测定，结果厚朴酚平均含量为7.12μg·ml-1,RSD为1.21%(n=6);和厚朴酚平均含量为2.54μg·ml-1,RSD为1.15%。 2.7加样回收试验 精密量取已知含量的清肝利胆口服6份，每份5ml，各精密加入2.2.1的对照品溶液1ml，1ml，2ml，2ml，3ml，3ml置10mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，按本法进行含量测定并计算回收率。测定结果见表1、表2。表1样品中厚朴酚回收率试验结果表2样品中和厚朴酚回收率试验结果
7、表3样品测定结果 2.8样品的测定 精密量取3个批号供试品溶液各2份,按本法制得供试品溶液,按本法进行含量测定结果，见表3。 3讨论 取对照品溶液在220～360nm波长范围内扫描，在294nm波长处有最大吸收，故选择294nm为检测波长。 测量厚朴中的主要成分厚朴酚、和厚朴酚方法有荧光法、薄层扫描法等。本方法无辅料干扰，操作简便，结果准确，可作为质量控制标准。 选择流动相时，分别以甲醇乙腈水(50：20：30)为流动相[3]，甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30)，后者分离良好且峰形较对称，故最终选择以
8、甲醇乙腈0.1%磷酸溶液(50：20：30)为流动相。【
