微生物发酵培养基的优化方法

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1、微生物发酵培养基的优化微生物发酵培养基的优化方法对于微生物的生长及发酵，其培养基成份非常复杂，特别是有关微生物发酵的培养基，各营养物质和生长因子之间的配比，以及它们之间的相互作用是非常微妙的。面对特定的微生物，人们希望找到一种最适合M:生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最人发酵产物的H的。发酵培养基的优化在微生物产业化生产中举足轻重，是从实验室到工业生产的必耍环甘。能否设计出一个好的发酵培养基，是一个发酵产品工业化成功中非常重要的一步。以工业微生物为例，选育或构建一•株优良菌株仅仅是一个开始，要使优良菌株的潜力充分发挥出來，还必须优化K发酵过程，

2、以获得较商的产物浓度（便于下游处理），较高的底物转化率（降低原料成木）和较高的生产强度（缩矫发酵周期）。设计发酵培养葙时还应时刻把工业应用的目的留在脑海里。一.发酵培养基的成分现代分离的微生物绝大部分是异养型微生物，它需要碳水化合物、蛋a质和前体等物质提供能呈和构成特定产物的需要。k营养物质一般包括碳源、氮源（冇机氮源、无机氮源）、无机盐及微量元素、生长因子、前体、产物促进和抑制剂等。另外，在设计培养基时还必须把经济问题和原材料的供应问题等因素一起考虑在内。此外，还耍考虑所筛选的菌种来源的地点环境，比如本实验室长期从事红树林微生物的分离及研究工作，红树林的环境处于海洋与陆地之W

3、，所以配制培养基所用的水除了一般的去离子水外还包括陈海水。如果在知道产物结构或者产物合成途径的情况下，我们可以有意识地加入构成产物和合成途径中所需的特定结构物质。我们也可以结合某一菌株的特定代谢途径，加入阻遏或者促进物质，使0的产物过暈合成。例如青樽素的合成会受到赖氨酸的强烈抑制，而赖氨酸合成的前体a-氨基已二酸可以缓解赖氨酸的抑制作用，jj'•能刺激赖氨酸的合成。这足因为（X-氨基已二酸足合成青霉素和赖氨酸的共同前体。如果赖氨酸过量，它就会抑制这个反应途径中的第一个酶，减少a-氨某已二酸的产量，从而进一步影响青霉素的合成。二.发酵培养基的设计和优化由于发酵培养基成份众多，且各

4、因素常存在交互作用，很难建立理论模型；另外，由于测景数据常包含较人的误差，也影响了培养基优化过程的准确评估，W此培养基优化工作的量大且复杂。许多实验技术和方法都在发酵培养基优化上得到应用，如：生物模型、单次试验、全因子法、部分因子法、PlackettandBurman法等。但每一种实验设汁都有它的优点和缺点，不可能只用一种试验设汁来完成所有的工作。1.单次单因了法实验室最常用的优化方法是单次单因子法，这种方法是在假设W素闽不存在交互作川的前提K，通过一次改变一个因素的水〒而其他因素保持恒定水T,然后逐个因素进行考察的优化方法。但是由于考察的因素间经常存迕交互作用，使得该方法并非

5、总能获得最佳的优化条什。另外，当考察的因素较多时，需要太多的实验次数和较长的实验周期［3］。所以现在的培养基优化实验屮一般不采川或不单独采川这种方法，而采用多因子试验。2.多因子试验多因子试验耑要解决的两个问题：（1）哪些因子对响应具有最大（或S小）的效应，哪些因子间具有交互作用。（2）感兴趣区域的因了•组合情况，并对独立变量进行优化。1.正交实验设计正交实验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少量的具有代表性的试验来代替全而试验，较快地取得实验结果。正交实验的实质就是选择适当的正交表，合理安排实验的分析实验结果的一•种实验方法。具体可以分为下面四步：（1）

6、根裾问题的要求和客观的条件确定因了和水平，列出因子水平表；（2）根据因子和水〒数选川合适的正交表，设计正交表头，并安排实验；（3）根拋正交表给出的实验方案，进行实验；（4）对实骑结果进行分析，选出较优的“试验”条件以及对结果冇显著影响的因了。.il•:交试验设计注重如何科学合理地安排试验，nH司吋考虑几种因素，寻找最佳因素水平结合，但它不能在给出的整个区域上找到因素和响应值之间的一个明确的蚋数表达式即回归方程，从而无法找到整个区域上因素的最侏组合和响应面值的最优值。正交方法可以用來分析因素之间的交义效应，似需要提前考虑那些因素之间存在交互作用，再根裾考虑来设计实验。因此，没冇预

7、先考虑的两因素之间即使存在交互作用，在结果中也得不到显示。对于多因素、多水〒的科学试验來说，正交法需要进行的次数仍嫌太多，在实际工作中常常无法安排，应用范围受到限制。2.均匀实验设汁如果仅考虑“均匀分散”，而不考虑“整齐可比”，完全从“均匀分散”的角度出发的实验设计，叫做均匀设计。均匀设计按均匀设计表来安排实验，均匀设计表在使用时最值得注意的是均匀设计表中各列的因素水T•不能像正交表那样任意改变次序，而只能按照原來的次序进行〒滑，即把原來的最后一个水T•与第一个水乎衔接起來，组成一个封闭阅，