人iv型胶原（col-iv）酶联免疫分析（elisa）

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1、人IV型胶原（COL-IV）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中IV型胶原（COL-IV）的含实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人IV型胶原（COL-IV）水平。用纯化的人IV型胶原（COL-IV）抗体包被微孔板，制成同相抗体，往包被单抗的微孔屮依次加入IV型胶原（COL-IV），再与HRP标记的IV型胶原（COL-IV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作川下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品巾的IV型胶原（COL-IV

2、）呈正相关。用酶标仪在450mn波长T测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人IV型胶原（COL-IV）浓度。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8°C保存标准品：7.2ng/ml0.5mlXIB0.5mlXl瓶2-8°C保存标准品稀释液1.5mlXl瓶1.5mlXl瓶2-8°C保存酶标试剂3mix1瓶6mix1瓶2-8°C保存样品稀释液3mlX1瓶6mlX1瓶2-8°C保存显色剂A液3mix1瓶6mix1瓶2-8°C保存显色剂B液3mlX1瓶6mlX1瓶2-8°C保存终止液3mlXl

3、瓶6mlXl瓶2-8°C保存浓缩洗涤液(20mlX20倍)XI瓶(20mlX30倍)XI瓶2-8°C保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程屮如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程屮如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上

4、清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反S冻融，以使细胞破坏并放山细胞內成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。1.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一

5、份待检测，其余冷冻备用。2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融.3.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品lOOpl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50pl,混匀；然后从第一孔、第二孔巾各取100（.il分别加到第三孔和第叫孔，再在第三、第叫孔分别加标准品稀释液50gl,混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50W弃掉，再各取50pl分别加到第五、第六孔屮，再在第五、第

6、六孔屮分别加标准品稀释液50ul,混匀；'混匀后从第五、第六孔屮各取50pl分别加到第七、第八孔屮，再在第七、第八孔屮分别加标准品稀释液50pl,混匀后从第七、第八孔中分别取50川加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50pl，混匀后从笫九笫十孔中各取50W弃掉。（稀释后各孔加样量都力50pl,i农度分别为4.8ng/ml，3.2ng/ml,1.6ng/ml,0.8ng/ml,0.4ng/ml）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔屮先加样品稀释液40pl，然后再加待测样品10PI（样品最终稀释度为5

7、倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静罝30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50Ml，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50fil,再加入显色