人1-3-β-d葡聚糖（1,3-β-dg）酶联免疫分析

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1、人1-3-3聚糖(1，3-3-DG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研宄使用。96T使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中1-3-[34)葡聚糖(1,3邙-00)表达。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人1-3-P-D葡聚糖(1，3-P-DG)表达。用纯化的人1-3-台4)葡聚糖(1，3-134)0)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品屮1-3-自-0葡聚糖(1,3-P-DG)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的1-3-3-D葡聚糖(1,34-DG)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物

2、TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波氏下测定吸光度(0D值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人1-3-P-D葡聚糖(1，3-P-DG)的存在与否。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1并瓦8阳性对照0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9阴性对照0.5mlX1瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实

3、验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50Hl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40pl,然后再加待测样品10pl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽:W:不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后

4、备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50pl,空白孔除外。1.温育：操作同3。2.洗涤：操作同5。3.显色：每孔先加入显色剂A50pl,再加入显色剂B50pl，轻轻®荡混匀，37°C避光显色15分钟.4.终止：每孔加终止液50（J，终止反应（此时蓝色立转黄色）。5.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37°C反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37°C

5、反应30分钟7洗板5次，；加入显色液A、B,37°C显色10分钟加入终止液A计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值21.00;阴性对照平均值20.10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD{K＜临界值（CUTOFF）者为1-3-P-D葡聚糖（1,3-P-DG）阴性阳性判定：样品OD值2临界值（CUTOFF）者为1-3-P-D葡聚糖（1,3-P-DG）阳性注意事项1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如米用完，板条应装入密封

6、袋屮保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测吋，参考波长为630mn7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液力2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°C。2.有效期：6个月