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1、银杏叶提取物抑制c【关键词】c-Jun银杏叶提取物缺血/再灌注肾细胞凋亡Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofGinaton(apreparationofGinkgobilobaextract)ontheapoptosisinducedbyrenalischemia/reperfusion(I/R)injuryinrats.MethodsTheexperimentoperationgroup(sham),I/Rgroup(I/R)anddrugtestgroup(Ginaton
2、).TheratmodelofbilateralrenalI/Rinjurypingtherenalpediclesfor45minandalloinedbyimmunohistochemistrytoinvestigatetheeffectofGinatonontheactivationofc-Jun.Apoptosisofrenaltubularepithelialcellsethod.ResultsThep-c-Junimmunoreactivityandthenumberofapoptoticcellsgroup(P
3、<0.05).AdministrationofGinaton30minbeforerenalischemiacouldsignificantlyinhibitep-c-Junimmunoreactivityanddecreasethenumberofapoptoticcellsafter3hofreperfusion(P<0.05).ConclusionItislikelythatGinatoncouldpotentlydecreasetheI/R-inducedrenaltubularepithelialcel
4、lapoptosisbyinhibitingtheactivationofc-Jun.Keyia/reperfusion,kidney;cellapoptosis肾脏缺血/再灌注（I/R）损伤是临床上导致急性肾功能衰竭(肾衰)常见原因,在肾脏相关手术如肾移植等,均可发生不同程度的再灌注损伤,目前仍无理想的防治措施。有研究证明,肾脏缺血/再灌注损伤可能与细胞凋亡密切相关［1］。而最近的一些研究显示，I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡与一些激酶和基因的激活、表达有关［2］。文献报道银杏叶提取物（Ginkgobilobaextract
5、,EGb）可以保护缺血性肾损伤［3］,但其机制仍然不清。本研究旨在探讨银杏叶提取物注射液金纳多（Ginaton）拮抗细胞凋亡的作用及其机制。1材料和方法1.1实验动物及试剂健康雄性SD大鼠,体重190～260g,由徐州医学院实验动物中心提供，生产许可证SCXK（苏）2003-003，使用证SYXK（苏）2002-0038。金纳多注射液(批号：050315)，每支5ml,含有银杏叶提取物17.5mg,其中银杏黄酮苷4.2mg，德国威玛舒培大药厂出品。1.2缺血/再灌注模型制备参照文献［3］方法适当加以改进。戊巴比妥钠45mg·
6、kg-1腹腔麻醉,于脊柱旁双侧行肾区切口,暴露双侧肾脏。钝性分离肾包膜，用无损伤动脉夹夹闭双侧肾蒂造成肾缺血，肾脏由鲜红色立刻变为苍白表明缺血成功。缺血45min松开动脉夹，恢复灌注，肾脏由暗红色逐渐变为鲜红，表明再灌注成功。1.3动物分组及处理SD大鼠随机分成假手术(Sham)组、再灌注(I/R)组、药物(Ginaton)组,每组6只大鼠。Sham组除不夹闭肾蒂，其余同I/R组；I/R组行缺血/再灌注处理，无其他干预措施；Ginaton组术前30min给予金纳多注射液（50mg·kg-1，ip），其他同I/R组。再灌注3h
7、后，处死所有实验动物,取肾组织标本在液氮中速冻后转-80℃贮存待用，组织学标本按常规方法保存。1.4检测指标1.4.1组织学检测肾组织标本用10%多聚甲醛固定,石蜡包埋,4μm厚切片,常规苏木精-伊红染色，观察各组肾脏病理改变。1.4.2免疫组化(,应用免疫组织化学方法检测肾组织中的磷酸化c-Jun的激活变化情况,操作按SP-9000HstostainPlusKits免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书进行。结果判断:磷酸化c-Jun阳性反应为细胞核深染呈棕褐色,不着色者为阴性。高倍镜下观察8个连续不重叠的视
8、野,计数阳性细胞，统计分析结果。1.4.3原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡肾组织标本常规处理,4μm厚切片,TUNEL染色按试剂盒（ApopTagPeroxidaseInSituApoptosisDetectionKit，Chemicon公司）说明操作，DAB显色,苏木精复染。镜下
