mir106b靶向下调apc蛋白促进人肝癌细胞增殖

《mir106b靶向下调apc蛋白促进人肝癌细胞增殖》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文miRl06b靶向下调APC蛋白促进人肝癌细胞增殖博士生研究生：申刚指导教师：李彦豪教授摘要肝癌是的发病率和死亡率分别居恶性肿瘤第6和第3位。全球每年新发病例约62．6万，死亡约59．8万。深入研究肝癌的发病机制，了解其生物学特性，是寻找肝痛新的诊断标志物和治疗靶点的基础。MicroRNA(miRNA)是一类长度为17～25个核苷酸的非编码小分子RNA，在转录后调节靶基因的表达，从而影响多种生物学功能。根据所调控靶基因功能的不同，miRNA具有抑癌基因和癌基因的双重作用。miRNA的表达谱与肿瘤的类型相关，不同类型的肿瘤具有明显

2、相互区别的miRNA表达谱，提示miRNA可以作为肿瘤分类的标志物，并可用于肿瘤的治疗和预后判断。microRNA对靶基因的调节主要通过与靶基因的3’非编码区互补结合(3’．UTR)，调控蛋白的翻译。其对细胞功能的调控与其调节的靶基因功能相关。miR一106b属于miR-106b一--25基因簇，由miR-106b、miR-93及miR-25组成，编码基因染色体定位于7q22．1。对不同组织来源的肿瘤miRNA表达谱分析发现，miR．106b在多种肿瘤组织及肿痛细胞株中都高表达，包括头颈部鳞癌、结肠癌、髓母细胞瘤、食管癌、多发性骨锈瘤、肝癌

3、等。Wnt／13．catenin(简称WnO信号传导通路是一条在生物进化中极为保守的通路。其中13．catenin是该通路的关键效应分子，正常情况下其在胞浆中含量很少，因为大量的B．catenin蛋白被axin／GSK．3／APC多蛋白复合物磷酸化后，通过泛蛋白化途径被降解。而当Writ蛋白与细胞表面受体Frizzled结合后，受体激活摘要Dishevelled家族蛋白，最终导致细胞巾B．cmemn增加。胞浆中增加的p—catenin就可以进入细胞核，与TCF／LEF家族转录因子相互作用，促进特定基因表达。而在I％catenin含量调节中，

4、APC蛋白起着非常重要的作用。APC基因(Adenomatouspolyposiscoli，hPC)是家族性结肠息肉痛(falIlilyadenomatouspolyposis，FAP)以及散发性结肠痛的抑癌基因，该基因的突变与结肠癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、食道癌的发生有密切关系。APC蛋白可与p．连环蛋白(fl-catenin)连接，促进13-catenin降解，如果APC受到抑制，则B．catenin在细胞浆内积累，积累达一定量后，可进入细胞核，与T细胞因子TCF结合，促进相关基因的表达。因此APC被认为是一种抑癌基因，在多种细胞过程中起

5、作用。APC的作用在调节Wnt／13-catenin信号通路中的作用非常重要。．因此在本研究中，我们通过检测miR-106b在肝细胞癌中的作用及机制。与正常肝组织和肝上皮细胞相比，肝癌组织和细胞株中miR-106b的表达显著升高。外源性表达miR-106b可促进细胞增殖，并引起细胞由G1期向S期转化；而抑制miR-106b贝IJ抑制细胞增殖，并引起G0／G1期阻滞。荧光素酶报告基因检测发现，miR-106b通过靶向WnUl3．catenin信号通路中的APC基因，抑$1JAPC基因表达，从而导致胞浆中B．catenin增加，并进入细胞核内，

6、从而引起其下游基因，如eyclinDl和pRB的激活，促进细胞增殖。发现miR．106b通过靶向APC基因3'-UTR，抑制APC基因的表达及Wnt／p．catenin信号通路的活性，促进HCC细胞的增殖。推测miR-106b在HCC的发生发展中起重要作用，其可以成为HCC治疗的一个新的潜在靶点，并可用于HCC治疗和预后，以及疾病监测的重要指标。方法1．分析miR-106b在肝癌细胞株和肝癌组织中表达情况。首先采用Real．timePCR方法检测8个HCC细胞株(HepG2，QGY-7703，BEL-7402，MHCC97H，HCCC．98

7、10，Hep3B，MHCC97L和Huh7细胞)与正常肝上皮细胞株(NLEC)中miRol06表达的差异；并选取8例HCC病例，检测肝癌组织和邻近非肿瘤组织中miR-106b表达的差异；并与NCBI／GEO中有关miR一106在肝癌中表达检测进行lI博士学位论文比对。2．检测外源性表达miR．106b对HCC细胞增殖的影响。通过构建含有miR-106b的pcDNA3．1质粒，转染QGY-7703和HepG2细胞，在细胞中过表达miR-106b，应用MTT方法，检测miR-106b对细胞增殖速率的影响；应用克隆形成实验，检测miR-106b过

8、表达对QGY．7703和HepG2细胞克隆形成能力的影响；应用软琼脂增殖实验，检测miR．106b过表达，对细胞不依赖锚定生长能力的影响，该不依赖锚定生长是恶性肿瘤迁徙性增强的显