细菌基因组dna提取试剂盒离心柱型

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1、细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）GK4003-10GK4003-20GK4003-50GK4003-100一.试剂盒组成ComponentsGK4003-1010PrepsGK4003-2020PrepsGK4003-5050PrepsGK4003-100100PrepsGenCleanColumn2.0-mlCollectionTubeLysisSolutionAW1Solution(a)AW2Solution(b)AEBuffer(c)TE(pH8.0)BoiledRNaseAProteinaseK(d)Lysoz

2、yme(f)SPBufferprotocol10104ml6ml3ml3ml2ml50µl30µl5mg1.0ml1202010ml12ml8ml8ml4ml240µl250µl15mg1.0ml1505025ml30ml20ml20ml10ml480µl500µl30mg1.0ml110010050ml60ml40ml40ml20ml120µl1000µl60mg1.0ml1(a)首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或

3、保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。(b)首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。(d)AEBuffer为10mMTris-HCl,0.5mMEDTApH8.5。TE(pH8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。(e)收到后分装-20℃冻存。不得将ProteinaseK直接加到Lysi

4、sSolution中，以免酶失活。(f)Lysozyme使用前加入按5mg溶于100µl计算，溶于SPBuffer，溶解后，分装于-20℃冻存。客户自备：PBS缓冲液，胰蛋白酶，无水乙醇运输储存温度运输室温储存ProteinaseK,Lysozyme,BoiledRNaseA:-20℃其他室温二．主要用途从细菌和各种培养细胞中小规模抽提基因组DNA。三．主要特点1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。3.快速，简捷，单个样品操

5、作一般可在50分钟内完成。4.多次柱漂洗确保提取细菌基因组的高纯度，OD260/280nm典型的比值达1.7～1.9，长度可达50～100kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。3四．培养细胞与细菌样品准备1．培养细胞的准备(1)对于悬浮培养细胞：1,000g室温离心5分钟，彻底去除上清。(2)对于单层培养细胞：吸去培养基，用PBS洗涤细胞，然后用胰蛋白酶消化细胞。当细胞从培养瓶表面脱落以后，将细胞转移到离心管中，1,000g室温离心5分钟，彻底去上清。(3)将离心去上清的细胞用200µlTE(pH

6、8.0)悬浮。处理细胞可达1×106～5×107个，增加处理细胞数量，请相应增加处理时间。2．细菌样品的准备(1)将适量的指数生长期细菌（最多可达5×108细菌，约0.5ml过夜培养菌液），8,000rpm，离心1分钟，彻底弃净培养基。(2)加入200µlTE(pH8.0)悬浮细菌，按照下表中的要求加入Lysozyme溶液，用吸头混匀，对于革兰氏阳性和革兰氏阴性菌酶解时间的要求是不一样的，详见下表。革兰氏阴、阳性菌所用溶菌酶浓度与酶解时间表溶菌酶终浓度加入Lysozyme体积室温下酶解时间革兰氏阴性菌400μg/ml1μl或

7、不加3～5分钟革兰氏阳性菌3mg/ml~8μl/200μl悬液5～10分钟五．操作步骤1.在按准备方法制备的200µlTE悬浮样品中，加入4µlRNaseA混匀，再加入4µlProteinaseK，加入200µlLysisSolution70℃保温10分钟。注意：(1)应按次序加入，不得将ProteinaseK先加入LysisSolution再加到样品中。2.冷却到室温，加入200微升无水乙醇，混匀。如有沉淀出现，用1ml枪头充分打匀,不影响提取。3.8,000rpm室温离心1分钟。取下GenClean柱，弃去收集管中的废液

8、。4.将GenClean柱放回收集管中，加入500µlAW1Solution，8,000rpm，室温离心1分钟。取下GenClean柱，弃去收集管中的废液。5.将GenClean柱放回收集管中，加入500µlAW2Solution，8,000rpm，室温离心1分钟。取下GenClean柱，