研究过敏性休克死亡豚鼠脏器中ige蛋白表达

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1、研究过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE蛋白表达【过敏性反应【目的：检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE的蛋白表达情况，探索法医学鉴定过敏性休克的病理形态学诊断标准.方法：建立豚鼠异种血清过敏性休克模型，利用组织芯片技术、采用免疫组化方法SP法检测25例过敏性休克死亡鼠脏器中IgE蛋白的表达情况,并和常规切片比较.结果：过敏性休克死亡豚鼠在肺小血管壁及其血管四周，气管黏膜上皮内、小血管壁及结缔组织和脾髓质中IgE蛋白呈阳性表达，而肝、肾、心等脏器中IgE蛋白表达呈阴性.结论：过敏性休克时，肺、气管和脾组织中可检见IgE.　　【过敏性反应；IgE；组织芯片技术；免疫组织化学；豚鼠　　0引言　　过敏

2、性休克是Ⅰ型***反应，少数短时间内发生死亡［1］.豚鼠在致敏后血清总IgE明显升高，抗原再次攻击前血清IgE抗体明显高于再次攻击后休克死亡者，提示IgE可能在组织中存留.我们在200401/200410利用组织芯片技术、采用免疫组化方法检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE的表达情况，并和常规病理技术进行比较.　　1材料和方法　　1.1材料　　多人混合的正常血清，井冈山学院2003级妇幼班部分学生提供.纯种Hartly豚鼠40只，雌雄不拘，体质量200~250g，随机分为正常对照组（8只）和实验组(32只)，由江西医学院实验动物中心提供.兔抗人IgE抗体、SP试剂盒及DAB显色液均购自Da

3、ko生物技术有限公司武汉分公司.过敏性休克动物模型的建立参照文献［2］.实验组豚鼠的一侧后爪掌皮内注致敏原0.15~0.20mL,形成皮丘.致敏后饲养20d后（饲养期间共死亡5只，其中实验组4只，对照组1只）于胸前区搏动最明显处刺进心腔，见有搏动性回血后注射人血清1mL，诱发过敏性休克，休克发生率100%，死亡率89.3%.取心、肺、肝、肾、脾、胃、肠、甲状腺、气管等组织，40g/L甲醛液固定，备作组织芯片，行HE染色和免疫组化染色.对照组豚鼠的一侧后爪掌皮内注射生理盐水0.15~0.20mL，饲养20d后，心腔内注射生理盐水1mL，未出现上述过敏症状，未死亡.断头正法后取组织作上述处理

4、.　　1.2方法　　组织芯片的制备参照文献［3］，用手工方法制作组织芯片.免疫组化染色SP法染色按试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗、二抗、抗生素蛋白链霉亲和素辣根过氧化物酶作对照.在光学显微镜下对切片IgE染色阳性情况进行半定量评估，阳性反应呈棕黄色，定位于细胞质、血管壁及结缔组织内.评分标准：①按细胞显色有无及深浅计分：无显色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分.②按显色区域的比例计分：无显色区域0分，显色区域10%~15%1分，显色区域16%~50%2分，显色区域51%~100%3分.再以两项计分之积判定结果：2分以下为阴性（-），2分为弱阳性（＋），3分为阳性（），4分以上为

5、强阳性（）.统计学处理采用秩和检验.　　2结果　　实验组豚鼠均于抗原攻击后0.5~1min开始出现活动减少，继而竖毛，躁动，呼吸困难，四肢软弱，抽搐，大小便失禁，最后25只豚鼠死亡；3只豚鼠症状逐渐缓解.死后解剖检查，肉眼所见：实验组和对照组各脏器均呈现急骤死亡的一般病理改变；镜下所见：实验组在肝、肾、脾间质及气管和胃肠黏膜下见少量嗜酸性粒细胞浸润，对照组未见嗜酸性粒细胞浸润，实验组肺水肿较对照组明显.在9个组织芯片中，对照组7例，在肺、肝、肾、脾、胃、肠等9个脏器组织均呈阴性反应；实验组25例，肺小血管壁及血管四周均出现浅黄色或棕黄色阳性区域，气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现

6、浅黄色或棕黄色区域；脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞；心、肝、胃、肠等脏器组织无显色.常规病理切片的肺、气管、肾、脾等4个脏器组织行免疫组化SP染色，对照组所有脏器组织呈阴性反应，实验组休克死亡25例肺小血管壁及血管四周均出现浅黄色或棕黄色阳性区域，气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现浅黄色或棕黄色区域；脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞；心、肝、胃、肠等脏器组织无显色.组织芯片免疫组化染色和常规病理切片免疫组化染色比较，阳性强度及范围均基本一致，无明显性差异（P%26gt;0.05，表1）.表1组织芯片和常规病理切片免疫组化染色结果比较（略）　　3讨论　　临床大量实践证实，

7、各种类型的***反应血清中总IgE均升高［4］.我们在肝、心、肾等组织均末检出IgE，在肺、气管、脾等组织中检出多量IgE，提示肺、气管可能是过敏性休克中受累最重的器官.肺、气管、脾检出IgE可能有助于从病理形态学角度诊断过敏性休克.组织芯片容纳的信息量大，省时、省力、节约试剂，又减少了实验误差.而且这两种方法免疫组化标记结果基本一致（P%26gt;0.05），和Fernebro等［5］比较20例直肠癌组织微阵列和大切片p53蛋白表