莹光定量检测hcmv

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1、莹光定量检测HCMV 　【摘要】目的：探讨巨细胞病毒（HCMV）感染引起婴幼儿肝功能的损害情况。方法：采用莹光定量PCR对2011年1月——2011年12月334例肝功能受损的患儿进行HCMV—DNA定量检测。结果：共有186例患儿HCMV-DNA检测结果阳性，阳性率为55.69%。结论：HCMV-DNA感染是引起婴幼儿肝功能损害的重要原因。荧光定量PCR可快速、敏感、准确地定量检测标本中HCMV-DNA,了解HCMV的早期感染和复制情况，有助于临床明确诊断与治疗方案的选择。  　　【关键词】胞病毒感染；肝功能损害；

2、荧光定量PCR；婴幼儿  　　【】R725.7【】A【】1007-8231（2012）02-0008-02  　　Jade-likestonelightquantitativedetection  　　HCMV-DNAintheinfantoftheapplicationoftheliverdamage  　　ZhangRunShuLiJun  　　（Thechildren'shospitalinhebeiprovince）  　　【Abstract】objective:tostudythecytomegalovir

3、us(HCMV)infectioncausesthedamageoftheinfantliverfunction.Methods:thelightofjade-likestonequantitativePCRinJanuary2011-December2011334casesofliverdamagechildrenHCMV-DNAquantitativedetection.Results:atotalof186casesHCMV-DNAtestresultispositive,positiverateagecaus

4、edbyinfectionistheimportantreasonfortheinfantliverfunction.FluorescencequantitativePCRcanfast,sensitiveandaccuratequantitativedetectionofspecimenHCMV-DNA,understandingofHCMVearlyinfectionsandcopy,andassistclinicaldiagnosisandtreatmentoptions.  　　【Keyegalovirusi

5、nfection;Liverfunctionisdamaged;FluorescencequantitativePCR;infant  　　人巨细胞病毒（humancytomegalovius,HCMV）亦称细胞包涵体病毒，属于疱疹病毒科，为双状DNA病毒，具有潜伏活动的生物学特征。HCMV是儿科感染的重要原因，严重的HCMV感染常累及多系统和脏器，肝脏是HCMV感染易累及的脏器，尤其是幼小儿童和免疫抑制个体[1，2]。本文通过荧光定量PCR检测患儿尿液中的HCMV-DNA来检测HCMV的感染情况，探讨其对婴幼儿肝功

6、能损害的临床意义，为临床诊治HCMV感染引起肝功能损害的患儿提供依据。现将结果报告如下。  　　1资料与方法  　　1.1临床资料：采集2011年1月至2011年12月334例肝功能异常的门诊及住院患儿尿液进行荧光定量HCMV-DNA检测。男性222例，女性112例；年龄为20天-3岁。﹤1岁的233例，1-3岁101例。  　　1.2.1标本的采集和处理用无菌5ml玻璃管取受检者晨尿1～3ml,密闭送检；样本混匀后取1ml于1.5ml离心管中，13,000rpm离心5分钟，弃上清。在沉淀中加1ml无菌生理盐水混匀，

7、13,000rpm离心5分钟，弃上清,保留沉淀。在沉淀中加入50ulDNA裂解液，震荡混允10秒钟，100℃保温10分钟，4℃保存10分钟，4℃13，000rpm离心2分钟，取上清作反应模板（标本可立即进行处理检测，也可保存于-20℃待检，保存期为6个月。标本不宜反复冻融。）  　　1.2.2试剂及仪器：使用复星医学科技发展有限公司生产的试剂盒。仪器为SLAN荧光定量扩增仪。有获得资格证书的操作人员严格按照说明书操作，按试剂盒说列条件扩增，有电脑分析计算定量结果。  　　1.2.3PCR程序：于PCR反应管中加入4u

8、lDNA模板提取液，扩增体系总容量为30ul,用已知HCMV-DNA含量的阳性定量参考品制备标准曲线，同时放置阳性和阴性质控品，置于自动荧光PCR仪上，50℃预反应1min,94℃预变性5min,进入循环，94℃5s,60℃30s,共40个循环。  　　1.3结果的判定标准：Ct值无任何数值为阴性结果，Ct值＜38为阳性结果，38≤Ct＜40为