浅述奶牛传染病检测和预防措施

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1、浅述奶牛传染病检测和预防措施浅述奶牛传染病检测和预防措施　一、材料与方法　　1.材料.L.　　乙型肝炎诊断试剂盒购于上海某生物有限公司；牛传染性胸膜肺炎补体结合反应抗原、标准阴性血清和阳性血清、溶血素补体由某生物制品厂提供；牛传染性鼻气管炎抗原、IBR弱毒株、阳性血清购于中国兽医药品监察所，阴性血清取自检查牛；奶牛血清来源于某省市的奶牛场和奶牛专业户。　　2.方法　　(1)酶联免疫吸附试验检测奶牛类人乙型肝炎　　①每孔加入待检样品50μL，设阴、阳性对照各2孔，每孔50μL，并设空白对照1孔。②手工洗板，弃去孔内液体，洗涤液注满每孔静置5s，甩干、

2、重复5次。③每孔加入酶结合物50μL(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育30min。④重复操作②。⑤每孔加显色剂A液、B液各50μL，充分混匀，封板，置37℃孵育15min。⑥每孔加入终止液50μL，混匀。⑦用酶标仪读数，取波长在450nm，先用空白孔校零，然后读取每孔D值。　　(2)类人乙型肝炎病理形态学观察　　用肝脏穿刺法观察类人乙型肝炎病理形态学。用长12～15cm，内径3mm的长注射针头对20头奶牛11～12肋间进行穿刺，取肝脏组织活体样本，将其保存于10％福尔马林中。同时解剖HBsAg、HBeAg双阳性奶牛，做病理切片观察

3、。用HE、VanGieson-氏、过碘酸一苯肼Schiff(PAS)希夫氏染色法分别对肝脏组织切片.进行染色，同时用透视电镜做超微结构观察。另将一部分肝脏组织活体样本放在灭菌的平皿中，剪碎研磨，用灭菌生理盐水稀释后，吸取上清液1.5mL，置Eppendorf管中，经差数离心和饱和硫酸铵沉淀，初提物再经150、300、500g/L蔗糖梯度离心，PEG浓缩后，负染，电镜观察病毒颗粒。　　(3)补体结合反应检测牛传染性胸膜肺炎　　血清(包括被检血清(样品血清)、阳性血清(补体结合试验标准血清)、阴性血清(补体结合试验标准血清)、致敏红细胞(对照)、抗原(对照)孔分别

4、加入抗原(补体结合试验抗原)，阴性血清对照孔、致敏红细胞对照孔不加抗原；然后分别加入补体，致敏红细胞对照孔不加补体；再加入灭菌巴比妥缓冲液，振荡混匀后置37℃水浴30min；再加入6％致敏红细胞(绵羊红细胞与15个单位的溶血素混合液)，振荡均匀后置37℃30min，2000r/min离心5min，观察结果。　　二、试验结果　　1.奶牛乙型肝炎　　(1)奶牛肝功能检测　　对HBsAg、HBeAg双阳性的奶牛进行肝功能检测，在10头双阳性中有8头的谷氨酸丙酮转氨酶(GPT)≥谷氨酸草酰酸转氨酶(GOT)，GPT在400～600U/L之间，表现为急性病毒性乙型

5、肝炎(AHB)。2头奶牛血清GPT缓慢上升，缓慢下降，GPT在200300U/L之间，表现为慢性病毒性乙型肝炎(CHB)。　　(2)奶牛乙型肝炎病毒形态学观察　　将HB-sAg、HBeAg双阳性奶牛肝脏组织做电镜观察，发现肝脏组织中有密集的HBV颗粒，包括大球形Dane颗粒、小球形颗粒、管球形颗粒3种。这些颗粒与人HBV的颗粒相似(图1)。　　(3)奶牛乙型肝炎病理组织学观察　　病牛肝脏主要表现为肝细胞的变性：胞浆疏松、气球样变(水肿变性)、脂肪变性、嗜酸性变、毛玻璃样变，肝细胞坏死，炎症细胞浸润，肝实质细胞增生和间质组织增生(图2、3)。　　(4)奶牛乙型肝

6、炎超微结构观察　　肝细胞胞浆内线粒体变性、坏死、溶解、消失。核膜的双层膜不清晰或破裂，核孔增大。胶质纤维变性、严重肿胀、变性、坏死(图4、5)。　　2.奶牛传染性鼻气管炎　　传染性鼻气管炎抗体滴度测定结果　　对29份阳性反应奶牛血清中和抗体滴度进行测定，血清两倍递增稀释，从1：1～1：32，结果均为阳性反应(中和指数在50％以上为阳性)(表1)。　　三、治疗　　目前奶牛乙型肝炎、传染性鼻气管炎尚无有效的治疗药物，只有对症治疗。为防止细菌的继续感染，可应用抗病毒药物和广谱抗生素或磺胺类药物进行治疗，高热时可注射复方氨基比林20～40mL。同时，也可强心、补液、解

7、毒治疗，如林格氏液1000～3000mL/次，安钠加2～5g/次、VC2～4g/次，每日2次。如关节痛可注射水杨酸钠溶液。　　四、综合防制措施　　从科学养殖人手，改善饲养环境，加强综合管理，采用合理的免疫程序。　　1.预防注射.L.　　免疫是预防各种疫病的有效手段，特别是目前需要免疫的疫苗种类很多，一定要制定合理的免疫程序，适时做好奶牛类人乙型肝炎、传染性鼻气管炎的免疫。用牛传染性鼻气管炎灭活苗免疫奶牛，经过半年的观察，临床症状好转；对疫区和受威胁区6月龄以上的牛，必须每年接种1次牛传染性鼻气管炎灭活苗。当暴发本病时，应立即隔离，同时对所有牛进行牛传染性鼻气管

8、炎的疫苗接种。牛传染性鼻气管炎疫苗目前