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时间:2018-11-11
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1、不同化学结构肌松药对骨骼肌成人型和胎儿型乙酰胆碱受体的作用【摘要】目的应用全细胞膜片钳研究罗库溴铵、维库溴铵或阿曲库铵对成人型和胎儿型肌肉乙酰胆碱受体的作用。方法通过脂质体转染法在HEK293细胞表达成人型和胎儿型乙酰胆碱受体。分别研究罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵各药对两种受体亚型的作用。结果罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵呈浓度依赖性抑制乙酰胆碱对成人型和胎儿型乙酰胆碱受体的激动作用。对成人型乙酰胆碱受体抑制程度由大到小依次为维库溴铵>阿曲库铵>罗库溴铵,其对胎儿型乙酰胆碱受体抑制程度由大到小依次为罗库溴铵>维库溴铵>阿曲库铵。结论不同化学结构肌松药对成人型
2、或胎儿型乙酰胆碱受体的抑制程度不同,而成人型或胎儿型乙酰胆碱受体对一种肌松药的亲和力也有差异。【关键词】乙酰胆碱受体;肌松药;相互作用;等效线图分析;HEK293细胞Effectsofrocuroniumbinedandatracuriumonadult-andembryonic-muscularnicotinicacetylcholinereceptors【Abstract】ObjectiveThisstudyinetheinteractionbet,vecuroniumandatracuriumonadult-andembryonic-muscularnicotinicace
3、tylcholinereceptorsppatch.MethodsTheadult-andembryonic-nicotinicacetylcholinereceptorsaximalcurrentsbytheapplicationofacetylcholine(100μM).Peakcurrents,vecuronium,atracuriumindividuallyusingptechnique.ResultsAllpoundstestedaloneandinbinationproducedrapidandreadilyreversible,concentration-depe
4、ndentinhibition.Thepotencyofvecuroniumisthegreatesttoadult-nicotinicacetylcholinereceptorandthepotencyofrocuroniumisthegreatesttoembryonic-nicotinicacetylcholienreceptor,asrocuronium,vecuroniumandatracuriumappliedindividually.ConclusionTheeffectsofdifferentmusclerelaxantsilarstructurebryonic-
5、nicotinicacetylcholinereceptors.【Keyusclerelaxant;interaction;isobiologram;HEK293cell肌松药主要作用于神经肌肉突触后膜的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR),阻断神经冲动的传导,从而使肌肉松弛。突触后膜的乙酰胆碱受体存在两种亚型即存在于健康成人肌细胞突触后膜的成人型乙酰胆碱受体(ε-nAChR)和存在于胎儿和某些病理情况(如肌肉去神经支配和烧伤等)患者的肌细胞膜的胚胎型乙酰胆碱受体(γ-nAChR)。一些临床研究发现烧伤患者对琥珀胆碱更敏感而对非去极化肌松药不敏感[1~4]。有许多因素影响肌松药的作用
6、,如体内分布容积、蛋白结合率、药物的代谢和消除等因素,在烧伤和去神经支配病人这些因素变化更大。为了更好反映肌松药与nAChR的作用,本研究应用脂质体转染技术在HEK293细胞膜上分别表达骨骼肌突触后膜乙酰胆碱受体的两种亚型(ε-nAChR和γ-nAChR),从而可以在受体水平研究罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵各药对这两种受体亚型的作用,并在此基础上观察相同化学结构和不相同化学结构的两种肌松药复合对这两种受体亚型的作用。1材料与方法1.1培养细胞采用无nAChR表达的HEK293细胞(中科院细胞所提供)作为重组nAChR的靶细胞。在37℃、含5%CO2的培养箱中用DMEM培养基(含1
7、0%小牛血清,100u/ml青霉素和100mg/L链霉素及2mM谷氨酰胺)中培养[2]。实验时,用0.25%胰酶消化传代于35mm一次性培养皿(密度为1×105)。培养24h。1.2亚克隆目的基因将含小鼠源性α、β、γ、δ和ε基因的原核细胞表达质粒pSP65α、pSP65β、pSP65δ、pSP64γ和pBSSK(+)ε(USASALK美国索克生物研究所提供)通过亚克隆技术连接到真核细胞表达质粒pcDNA3.1上。并用基因测序法鉴定连接是否正确。1.3HEK293细胞脂质体转染及
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