大蒜素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响

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1、大蒜素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响作者：胡昔奇李先辉郑尧帆龙颖曹萍张洁【摘要】目的观察大蒜素对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响。方法采用D半乳糖建立AD小鼠模型，大蒜素治疗组在造模的同时皮下注射大蒜素。通过行为学方法，观察大蒜素对AD小鼠记忆能力的影响;测定各组脑组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;常规HE和镀银改良法染色观察小鼠海马及皮质的形态学改变。结果模型组与对照组、大蒜素治疗组比较，小鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质

2、出现β淀粉样蛋白沉积及老年斑;大蒜素治疗组和对照组的丙二醛(MDA)含量较模型组显著降低(P<0.05)，SOD活性明显高于模型组(P<0.05)。结论大蒜素在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效，可以有效改善AD小鼠空间学习记忆能力损害。【关键词】大蒜素;阿尔茨海默病;行为学;抗氧化能力大蒜素是大蒜的主要成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗血小板聚集、提高免疫、清除自由基、护肝、降血脂、降血压及预防心血管疾病等生理学作用〔1〕。因其具有较好的脂溶性，可通过血脑屏障，因此在防治脑血管病方面的作用也备受关注。研究资

3、料显示,大蒜素可改善血液流变性、增加脑血流量、清除自由基、改善脑功能及减轻急性脑梗死时缺血再灌注损伤〔2〕。大蒜素作为一种具有良好发展前景的天然抗氧化药物,具有抗氧化延缓衰老的作用〔3〕，同时对脑缺血再灌注大鼠海马神经元具有保护作用〔4〕,而氧化应激和海马神经元的损伤是阿尔茨海默病(AD)的主要发病机制。本研究采用D半乳糖致小鼠AD模型，从组织形态学角度,观察大蒜素对AD脑组织的保护作用及对小鼠学习记忆能力的改善作用，并对其抗氧化机制进行初步研究,为临床应用大蒜素防治AD提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1实验动

4、物健康昆明雌性小鼠30只，清洁级，体重18～22g，湖南长沙市开福区东创实验动物服务部提供，批准号：001847。　　1.2药品与试剂大蒜素肠溶胶囊(20mg/粒，湖北金龙福药业有限公司，批号H42022592)，D半乳糖由国药集团化学试剂有限公司提供(批号20050422)，兔抗P38MAPK、SABC免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒由武汉博士德有限公司提供，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒及超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。　　1.3主要仪器BX51系统显微镜(

5、Olympus)、微量进样器(上海安亭微量进样器厂)、UV3100PC型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)。　　1.4动物分组及造模按照改良的Morris法对60只小鼠进行连续7dMorris水迷宫定向航行训练〔5〕。每天分上下午2个时段，每个时段训练2次,并记录小鼠从放入水槽至找到平台的时间(逃避潜伏期)，若120s仍找不到平台，则由实验者将小鼠放置于平台上，逃避潜伏期记为120s，并让小鼠在平台上休息30s。根据训练成绩，选择成绩较好的30只小鼠。按体重分层随机分成3组：AD模型组，大蒜素治疗组，阴性对

6、照组。每组10只。AD模型组与大蒜素治疗组皮下注射12.5%D半乳糖40μl，连续60d。　　1.5给药方法大蒜素治疗组在造模的同时按10ml/kg进行腹腔注射大蒜素肠溶胶囊提取物0.48g·kg-1·d-1;AD模型组和阴性对照组给予相同剂量的生理盐水，连续60d。　　1.6水迷宫行为学检测连续给药60d后，对小鼠进行改良的Morris水迷宫法检测，记录小鼠的逃避潜伏期，评价各组大鼠记忆能力的改变。　　1.7抗氧化活性检测行为学检测结束后，用25%的乌拉坦麻醉小鼠后固定于自制的手术板上，置于解剖盘中，开胸暴露并游离

7、心脏。切开右心房，经左心室插入灌流4℃生理盐水20～30ml，直至肝脏颜色转白及右心房流出液澄清后，继续灌注4%甲醛20～30ml，取脑组织海马部组织块1cm3左右，4%甲醛浸泡固定24h后，做石蜡组织切片。测定残余脑组织重量，按重量体积比加4℃生理盐水制成10%的组织匀浆，离心(2500r/min，10min)，取上清液，置4℃备用。测定SOD活力和MDA含量。　　1.8组织形态的观察分别采用HE染色和铃木神经组织镀银改良法〔6〕染色观察小鼠海马神经细胞及神经原纤维缠结()。　　1.9统计学方法数据用x±s表示，两个

8、样本比较采用t检验，多个样本均数比较采用单因素方差分析,所有统计由SPSS17.0软件处理。　　2结果　　2.1大蒜素AD模型小鼠学习记忆能力的影响改良的Morris水迷宫记录小鼠的潜伏期,实验结果显示，AD模型组小鼠的潜伏期(54.25±4.34)s，明显长于大蒜素治疗组(6.67±1.81)s和阴性对照组(12.18±3.94