解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞caspase

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1、解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞Caspase作者：毛德文陈月桥余晶黄古叶王丽龙富立【摘要】目的探讨解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的作用及可能的机制。方法将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化淤颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组，用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型，观察各组小鼠存活率，SYBR荧光实时定量PCR法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3mRNA)的表达。结果成模后48h存活率解毒化淤颗粒组高于其他药物组;促凋亡因子Caspase

2、-3在解毒化淤颗粒组肝组织中表达量低，而在其他药物干预组及模型组中则高表达。结论急性肝衰竭中Caspase-3表达与肝细胞凋亡程度有相关性，解毒化淤颗粒能下调内毒素肝损伤肝细胞Caspase-3表达并抑制其凋亡效应，降低肝衰竭小鼠死亡率，提示解毒化淤颗粒抑制肝细胞凋亡有可能是其防治急性肝衰竭的机制之一。【关键词】解毒化瘀颗粒;急性肝衰竭;细胞凋亡;SYBR荧光实时定量PCR　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofJieduhuayugranuleon

3、hepatocyteapoptosisinacuteliverfailuremiceanditspossiblemechanism.MethodsKunmingmicelydividedintoblankcontrolgroup,modelgroup,andJieduhuayutreatinggroup.Acuteliverfailureice.ThesurvivalrateRNAequantitativePCRassay.ResultsAfter48h,thesurvivalrateinJied

4、uhuayutreatinggroupetimepro-apoptoticfactor,Caspase-3expressioninlivertissueisloentgroups.ConclusionTheCaspase-3expressionisrelatedentgranulecanreducelivercellinjurybythroughinhibitingtheexpressionofCaspase-3,andreducingmortalityrateofliverfailuremice

5、.　　Keya公司提供，产品批号：331307，进口注册号:h20030303);安宫牛黄丸(由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂提供，批准文号：国药准字Z11020076，产品批号：6017014)。　　1.3试剂造模剂：氨基半乳糖D-GalN[D-(+)-Galactosaminehydrochloride](由sigma公司提供，产品批号：G0500)，内毒素脂多糖LPS(lipopolysacchar-rides，由sigma公司提供，产品批号：L2880cat.No.L8880)。SYB

6、R荧光实时定量PCR:总RNA抽提试剂Trizol为Invitrogen公司产品，反转录试剂盒SuperscriptTMⅡRnaseH-ReverseTranscriptase为Epicentre公司产品，LightCycler-FastStartDNAMasterSYBRGreenⅠ试剂盒为Roche公司产品、dNTP、Oligo-dT为上海生工生物工程有限公司公司产品，Rnasin、DTT、pMD18-TVector为Epicentre公司产品。　　1.4仪器DU-640型蛋白核酸分析仪(美国

7、Back-man公司);5417R型低温高速离心机(德国Eppendorf公司);JY92-2D型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所);ST-Ⅱ型大型半干式转移电泳槽(大连竞迈生物科技有限公司);MV-ILA型小型双垂直板电泳槽(大连竞迈生物科技有限公司);GeneAmpPCRSystem9700(AppliedBiosystems)。　　2方法　　2.1动物模型制作采用腹腔联合注射D-GalN+LPS致急性肝衰竭小鼠模型,方法参考张磬等[3]的方法，使用前用生理盐水将D-GalN配置成的1G/

8、100ml的溶液,再用1mmol/L氢氧化钠溶液调整pH值至7.1～7.2。LPS用无菌生理盐水配成1μg/6ml,过滤除菌。注射量为D-GalN600mg/kg体重与LPS10μg/kg体重。　　2.2动物分组及给药160只SPF级昆明小鼠,随机分为空白组(16只)、模型组(36只)、解毒化瘀颗粒组(36只)、乳果糖组(36只)、安宫牛黄丸组(36只)。雌雄各半。各药物组均取20只用于观察死亡率。　　解毒化淤颗粒组给予57.55g生药/kg，乳果糖组参照　　定量模板的克隆和制备及