皱皮木瓜总黄酮分离纯化及镇痛作用机制研究

《皱皮木瓜总黄酮分离纯化及镇痛作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、三峡大学硕t学位论文皱皮木瓜总黄酮分离纯化及镇痛作用机制研究姓名：孔劲松申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：杨兴海20080401内容摘要R的研宄大孔吸附树脂分离纯化皱皮木瓜总黄酮（FlavonoidfromLagenariaChaenomels，FLC）的工艺；探讨FLC的镇痛作用及其镇痛机制。方法1.称取一定量皱皮木瓜粉末，用70%乙醇于70°C水浴槽回流浸提3次，每次1小时，过滤，合并滤液减压浓缩至无醇味，加适量蒸馏水，分别用乙酸乙脂、水饱和正丁醇萃取，减压浓缩分别得乙酸乙脂部分与正丁醇部分；将正丁醇部分溶于蒸馏水中制成澄清的溶液即为FLC溶液（样品液）；采用

2、DM-301、DA-201、DS-40KD-101-I、D-1015种型号大孔吸附树脂对FLC进行吸附纯化，以FLC收率、纯度为考察指标综合评价，优选出最佳树脂；并对优选出的树脂进行洗脱溶媒和洗脱用量的探讨。2.利用纯化的FLC进行动物镇痛实验药效学观察：（1）小鼠热板模型法调节热板仪温度至55°C,以雌性小鼠接触热板至开始舔后足的潸伏期为基础痛阈指标；取雌性小鼠60只，体重18-22g，选择其基础痛阈在10秒至25秒之间，随机分为6组，腹腔注射给药（给药剂量根据前期研究基础而定），分别测得小鼠给药后捕阈值，进行统计分析；（2）小鼠扭体模型法取小鼠50只，体重18-22

3、g,随机分为5组，腹腔注射0.6%冰醋酸0.2ml/只，观察注射醋酸后30min闪扭体反应次数作为致痛的指标，进行统计分析；（3）兔耳皮下1C渗透外周模型法在耳根部中央动脉顺血流方向用'针尖刺入后，立即注入0.5ml肝素进行局部抗凝处理并固定；将耳背部内、外两侧耳缘静脉近心端分别用7#注射针头沿静脉血流方向逆向刺入并引流至体外，用蛙心夹夹住静脉以阻断其回流。在耳尖部固定一直径约0.8cm金属圈，充以饱和氯化钾溶液棉球，作为刺激电极正极，在耳根部固定一相同金属圈，充以生理盐水棉球，作为参考电极，两电极连上BL-420E生物机能实验系统，逐步加大刺激电流，以引起家兔挣扎吋的

4、最小刺激电流为痛阈指标；取家兔36只，体重1.5-2.0Kg,随机分6组，制成兔耳皮下1C渗透外周镇痛模型，分别测定记录给药前后痛阈，进行统计分析。（4）FLC对坐骨神经组织钙含量影响按文献制备蟾蜍坐骨神经标本并称重，随即将标本浸4°C的任氏液中lh,分别加入50mmol/LKCL和10-5mol/LNA,刺激钙通道开放，以增加钙离子内流，继续在4°C任氏液中保存lh后取出标本，用无钙任氏液冲洗2次，以冲去标本表而的钙离子，滤纸吸干，放入去离子水清洗的坩锅内待消化，FLC组则在未使用激动剂前将标本浸在不同浓度的FLC屮30min,再分别放入上述相同的激动剂屮，后续处理相

5、同。所有标本分别加入混合酸（硝酸0.9,高氯酸0.1）1.0ml在电热板上徐徐加热，消化至无色，待高氯酸冒烟吋取下，加入2%HCL溶解，再加入500ppm镧盐，定溶后待测。采用HITACHIZ-2000型原子吸收分光光度计测定（测定波长42207nm，灯电流10mA,狭缝0.7nm）。实验结果换算成每克样品含冇多少微克（PPM）钙。结果：1.5种大孔吸附树脂静态饱和吸附量以干树脂计分别为：70.80,79.72,66.24，63.12，56.16mgg-i（干树脂）；静态洗脱率分别为:85.76%,79.24%,73.57%,81.45%,71.01%；DM-301型树

6、脂综合性能最好，以50%乙醇为洗脱剂得到的目标产物纯度最高。2.FLC的镇痛实验结果表明：FLC明显延长电热板致痛小鼠舔足潜伏期，其延长效应能被EGTA增强，而被CaCl:所拮抗，维拉帕米可部分翻转CaCh对FLC延长小鼠舔足潜伏期的拮抗;FLC明显降低小鼠扭体反应次数，表明对化学致痛模型也具镇痛作用，且镇痛作用与FLC剂量存在依赖关系；FLC对兔耳皮下K+渗透致痛模型可显著提高痛阈，其镇痛作用能被EGTA增强，被CaCL所拮抗，表明FLC也冇很强的外周镇痛作用，且镇痛作用与钙桔抗有关。坐.骨祌经组织钙含量测定结果表明，5%,10%和20%FLC呈浓度依赖性抑制50mm

7、ol丄4K+诱导Ca2+含量增加，10%FLC抑制lO-smmol.L-iNE诱导的Ca＞含量增加。结论1.DM-301型大孔吸附树脂表现出较好的综合性能，可以用于纯化FLC;用30%和50%的乙醇作为洗脱剂较好。2.本研究表明FLC的镇痛作用及其镇痛机理可能与其钙拮抗，抑制神经组织和非神经组织钙通道，减少痛介质释放有关。关键词：FLC大孔吸附树脂分离纯化镇痛作用坐骨神经钙拮抗AbstractObjective:ToestablishatechnicalprocessforthepurificationofflavonoidsfromCh