虎杖苷对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗和血清肿瘤坏

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1、虎杖苷对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗和血清肿瘤坏【摘要】目的探讨虎杖苷对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗(IR)以及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法健康雄性SD大鼠44只，随机分为正常组(A)和模型组(M)，模型组给予高脂饲料喂养8周，造模成功后将模型组随机分为5组：空白模型组(B)、虎杖苷高剂量组(C1)、虎杖苷中剂量组(C2)、虎杖苷低剂量组(C3)、非诺贝特组(D)，每组7只，高脂饲料持续8周后，A组、B组予以生理盐水灌胃，5ml/次，C1、C2、C3分别以160，80，40mg·kg-1·d-1虎杖苷混悬液灌

2、胃，D组以100mg·kg-1·d-1非诺贝特混悬液灌胃。持续4周后处死动物,分离血清，检测、计算各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FNS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI)、TNF-α水平。结果虎杖苷高剂量组与模型组IRI、ISI、TNF-α水平存在显著差异(P<0.05，P<0.01)，且在改善IR方面虎杖苷高剂量组优于西药对照组(P<0.01)。结论虎杖苷能改善NAFLD大鼠体内IR状态，降低TNF-α水平，是其治疗NAFLD的可能作用机制。【关键词】虎杖苷;非酒精性脂肪肝;胰

3、岛素;血清肿瘤坏死因子非酒精性脂肪肝(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是遗传-环境-代谢应激相关因素所致，以肝细胞内脂肪堆积为主的病理综合征，随着社会经济发展，NAFLD患病率迅速增高，现已成为危害人类健康的三大肝病之一，其与胰岛素抵抗及其相关的代谢综合征和遗传易感性密切相关，临床尚无理想的治疗药物，本文主要研究中药提取物虎杖苷对非酒精性脂肪肝模型大鼠的治疗作用，并从胰岛素抵抗(IR)以及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)影响探讨其可能作用机制。　　1材料　　1.1动物健康雄性SD大鼠4

4、4只，体质量(200±10)g，SPF级，由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号：0035578)。　　1.2药物及试剂虎杖苷(98.63%，HPLC，购自江苏泽朗医药科技有限公司)，非诺贝特(国药准字H31021491，批号070310，购自南方医科大学附属南方医院)。胆固醇购自广州威佳生物科技有限公司，ELISA试剂盒购自广东达晖生物科技有限公司，猪油购于广州加益食品有限公司，大鼠基础饲料由南方医科大学实验动物中心提供，高脂饲料由南方医科大学实验动物中心加工生产。　　2方法　　2.1动物模型的建立和分组健康雄性SD大鼠

5、44只，体质量(200±10)g，SPFA级，称重后分笼喂养，每笼4只，标号，饲养于南方医科大学中医药学院实验动物中心。正常喂养1周后，随机分为两组，正常组(A)和模型组(M)，正常组给予标准饲料，模型组给予高脂饲料(高脂饲料配制：10%猪油+2%胆固醇+88%标准饲料)喂养，8周后，分别从正常组和模型组随机挑选1只，取肝脏做病理切片，证实非酒精性脂肪肝形成。再将模型组随机分为5组：空白模型组(B)、虎杖苷高剂量组(C1)、虎杖苷中剂量组(C2)、虎杖苷低剂量组(C3)、非诺贝特组(D)，每组7只，组间大鼠体重差异无显著性(

6、P>0.05)。正常对照组以标准饲料喂养，其余高脂饲料喂养。喂养期间，实验动物自由饮水和进食，动物房保持安静，自然采光，温度25℃左右。喂养持续8周。　　2.2给药8周后，A组、B组予以生理盐水灌胃，5ml/次，C1、C2、C3分别以160,80,40mg·kg-1·d-1虎杖苷混悬液灌胃，D组以100mg·kg-1·d-1非诺贝特混悬液灌胃。持续4周。　　2.3标本采集从造模开始算，第12周末当晚大鼠禁食不禁水12h，次日上午称重后，用10%水合氯醛以0.35ml/100g浓度腹腔注射麻醉，腹主动脉取血8ml，4℃，

7、3000r/min离心10min，分离血清。-20℃保存。迅速提取肝脏，称重，4℃生理盐水冲洗，在最大叶距边缘5mm处取小块肝组织，中性福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色。　　2.4指标检测空腹胰岛素(FNS)：放免法测定，将样本血清与抗血清混合反应，在加入标记抗原进行竞争性结合反应，反应完全后，加入PR免疫分离剂，分离出抗原抗体混合物，测定复合物的放射性(B)，计算各标准管的结合率(B/B0%)。做出标准曲线，查出样品浓度;空腹血糖(FBG)：采用酶法，严格按试剂盒说明书操作;计算胰岛素抵抗指数(IRI)=FBG×FNS/2

8、2.5，胰岛素敏感指数(ISI)=1/(FBG×FNS);TNF-α：ELISA法，按试剂盒操作步骤检测。　　2.5统计分析计量资料采用±s表示，采用SPSS13.0软件单因素方差分析(OneRNA的过度表达，提示TNF-α在NASH的损肝CK网络中处于中心地位[2]，TNF-α可通过多种