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1、大鼠卵巢过度刺激综合征模型与血管内皮生长因子和白【摘要】目的观察大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型中血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-6（IL-6）的变化,探讨其与OHSS的相关性，为临床上进一步治疗开拓新的途径。方法将未成年雌性SG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)制成OHSS模型；对照组皮下注射等量生理盐水。用ELISA法检测血中VEGF和IL-6的含量,采用免疫组化方法观察大鼠卵巢黄体和子宫VEGF和IL-6的表达。结果实验组卵巢黄体中VEGF和IL-6明显表达,较对照组在统计学上有显著性差异，血清中VEGF
2、和IL-6含量明显高于对照组，在统计学上有显著性差异（P＜0.05)。结论VEGF和IL-6与OHSS具有密切关系。【关键词】卵巢过度刺激综合征血管内皮生长因子白细胞介素-6免疫组化相关性研究卵巢过度刺激综合征(ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS)是临床上诱发超排卵过程中较常见的医源性并发症，严重者可引起胸腹水、血液浓缩、血栓形成、肝肾功能衰竭甚至死亡。其发病的中心环节是毛细血管通透性增加，与卵巢过度分泌和产生血管活性物质有关。其中，血管内皮生长因子(vascularedothelial
3、groareserumgonadotropin,PMSG,天津实验动物中心)的生理盐水0.2ml,第5天(最后一次注射PMSG后24ｈ)注射含有100IUHCG(丽珠制药厂)的生理盐水0.2ｍｌ。48ｈ后卵巢显著增大,表面紫褐色,有多个卵泡形成,出现腹水表明建立了大鼠ＯＨＳＳ模型。对照组同期皮下注射等量生理盐水。 1.4标本采集和贮存HCG注射72h后即29d龄时，肌肉注射氯氨酮（0.1mg/kg）麻醉大鼠，尾静脉注射1%的EvansBlue(EB,Sigma)0.1ml。30min后从大鼠眼眶采血1ml入抗凝管，离心（3
4、000r/min，10min）取血浆-20℃保存备检。另采血1ml于试管中，待血液标本凝固后，离心（3000r/min，10min）吸取血清-20℃保存备检。脱颈处死大鼠。正中切开腹腔，观察有无腹水,然后按照Ujioka［2］和Khanna［3］的改良方法用5ml生理盐水冲洗腹腔。将冲洗液收集到试管中,稀释至10ml,加0.1mol/L氢氧化钠0.05ml过滤,并以3000r/min的速度在室温下离心10min。然后用分光光度计(国产721型)在波长590nm测定OD值。随后取出双侧卵巢组织，用生理盐水清洗干净。用4%多聚甲
5、醛固定24ｈ后,常规石蜡包埋,5～7μｍ连续切片,用于免疫组化染色。 1.5观察指标 1.5.1腹腔毛细血管通透性根据标准浓度及其OD值绘制标准曲线,算出腹腔冲洗液EB的含量。 1.5.2ＶEGF和IL-6蛋白质水平测定采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）。大鼠外周血清VEGF测定定量试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供，灵敏度为3pg/ml，板内板间变异系数均<9.5%。血浆IL-6定量试剂盒购自上海雄森科技实业有限公司,检测方法按照说明书进行。每个样品均设2个复孔,重复3次试验,结果用MK2型酶标仪读取吸光值
6、，绘标准曲线求相应值（pg/ml）。 1.5.3VEGF和IL-6蛋白质免疫组化染色采用SP法。一抗VEGF和IL-6兔抗IgG多克隆抗体购于santacruze公司，SP9001试剂盒及DAB显色剂购于北京中山生物技术有限公司，具体操作过程按说明书进行,ＤＡＢ显色,苏木素复染。每组试验重复至少3次。用PBS代替一抗作为阴性对照。 1.5.4免疫组化结果判断光镜下观察和图像分析,VEGF定位于黄体细胞,胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。Il-6在卵巢和子宫内膜均有表达。选用同批染色切片,每张切片随机选取5个视野(200×)
7、,Nikon尼康光镜显微照相机采样，图像扫存后Motic6.0数码医学图象分析系统测定平均光密度进行分析。 1.6卵巢过度刺激综合征诊断标准根据Golan［4］标准,卵巢体积增大、腹腔毛细血管的通透性增加和腹水均出现方可诊断为卵巢过度刺激综合征。 1.7统计学处理统计方法所有计量资料采用±s表示,均数差异的显著性采用SPSS统计软件进行方差分析,P<0.05表示在统计学上有显著性差异。 2结果 2.1OHSS大鼠腹水EB含量的变化OHSS大鼠腹腔EB含量卵巢过度刺激组腹腔EB含量显著高于对照组，在统计学上有显著
8、性差异（P<0.05）。见表1。 2.2OHSS大鼠血中ＶEGF和IL-6的改变OHSS大鼠血中ＶEGF和IL-6含量显著高于对照组，在统计学上有显著性差异（P<0.05），见表2。 表1OHSS对大鼠腹腔EB含量的影响（略） 与对照组比较,*P<0.05;n=10
