人il-17af定量检测试剂盒(elisa)说明书

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1、仅供科研使用，不得用于临床检验。人IL-17AF定量检测试剂盒（ELISA）说明书【货号】YKE-1434【产品名称】通用名称：人IL-17AF定量检测试剂盒（ELISA）英文名称：HumanIL-17AF【包装规格】96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中IL-17AF的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-17AF单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的IL-17AF与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲

2、和素(streptavidin-HRP)。洗涤后，加入显色底物TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中IL-17AF的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450nm波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。【主要组成成分】主要成分组分规格数量包被微孔板96T1板标准品4000pg/mL2管抗体80uL1管辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素150uL1管10×检测缓冲液5mL1瓶标准品稀释液5mL1瓶TMB显色液10mL1瓶TMB终止液10mL1瓶洗涤缓冲液(20X)30ml1瓶封板膜4张注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致【样本要求】样本类型和采集细胞培养上清300g离心1

3、0分钟去除沉淀物，即刻检测,或者分装，-20℃以下贮存。血清样本分离管分离血清。在1000g离心之前，使血样凝集30分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃以下贮存。血浆样本EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。1000g离心30分钟收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃以下贮存。本试剂盒可能适用于其它生物学样本。细胞培养上清、血清和血浆已经过验证。注意：检测前，样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。样本应分装并贮存于-20℃，以避免人IL-6活性的丢失。如果在24小时内检测，样本可以存放在2-8℃。避免样本的反复冻融。在检测前，冷冻样本应该缓慢地恢复至室温，

4、轻柔地混匀。样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在-20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。【检验方法】试剂准备检测前请将所有的试剂、样本恢复至室温。如果浓缩的试剂出现结晶，37℃温浴，直至结晶全部溶解。1×洗液吸取20×浓缩洗液30ml至1L的量筒，加蒸馏水或去离子水至600ml，轻轻混匀，避免泡沫。转移至干净瓶内。2-25℃贮存，1×洗液可稳定30天。1×检测缓冲液吸取10×浓缩检测缓冲液5ml至100ml量筒，加蒸馏水或去离子水至50ml，轻轻混匀，避免泡沫。2-8℃贮存，1×检测缓

5、冲液可稳定保存30天。检测抗体稀释前充分混匀。根据标准品和待测样本的数量，用1×检测缓冲液按1：100稀释浓缩的检测抗体。注意：请在30分钟内使用稀释后的检测抗体。辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释前充分混匀。根据标准品和待测样本的数量，用1×检测缓冲液按1：100稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。注意：请在30分钟内使用稀释后的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。样本稀释如果样本需要稀释，请用试剂盒提供的1×检测缓冲液稀释血清/血浆样本，用细胞培养基稀释细胞培养上清。人IL-17AF标准品用蒸馏水或去离子水重溶人IL-17AF标准品，重溶体积标注在人IL-17AF标准品的标签上。轻柔地涡

6、旋震荡，确保充分混匀，重溶后标准品的浓度为4000pg/ml。重溶后静置10-30分钟。稀释前充分混匀。请使用聚丙烯管进行标准品稀释。标准曲线制作血清/血浆样本标准曲线的制作：取250μl浓缩的人IL-17AF标准品，加入250μl标准品稀释液，作为标准曲线的最高浓度(2000pg/ml)。在每一个试管中加入250μl标准品稀释液。使用高浓度标准品做1：1系列稀释。每次移液时，请确保充分混匀。以标准品稀释液作为标准曲线的零浓度。细胞培养上清样本标准曲线的制作：取250μl浓缩的人IL-17AF标准品，加入250μl细胞培养基，作为标准曲线的最高浓度(2000pg/ml)。在每一个试管中加入25

7、0μl细胞培养基。使用高浓度标准品做1：1系列稀释。每次移液时，确保充分混匀。以细胞培养基作为标准曲线的零【检测步骤】检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。1.准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。2.将不需要的板条拆卸下来，放回装有干燥剂的铝箔袋，重新封好封口。3.加入300μl1×洗液静置浸泡30秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后，在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后，请立