一种南海海蔡中共附生真菌分离鉴定和一株真菌活性次级代谢产物的研究

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1、～科南海海葵中共附生粪菌豹分离鉴定和一栋真菌活健次级代谢产物的研究。“一种南海海葵中共附生真菌的分离鉴定和一株真菌活性次级代谢产物的研究摘要在竞争激烈的海洋环境中，体质柔弱或移动缓慢的无脊椎动物如海绵、珊瑚和海葵等却能够安然生存，这主要是依靠体内产生的次级代谢产物，这些化学物质不仅在物种的相克与共生、争夺食物和生存空间等方面发挥重要作用，而且也是筛选发现药物先导化合物的宝贵资源。但是来源于大型生物中的海洋药源已成为茸前海洋药物研究领域面临的一个瓶颈问题。丽海洋微生物瞻于不受自然条件的限制，可实现其活性物质的大量发酵生产，因

2、此已经成为解决药源问题的一个重要的来源。更重要的是，近年来不断发现曾被认为是海洋动植物产生的活性物质，其真正生产者可能是其共附生的海洋微生物，因此研究海洋来源的微生物具有重要的现实意义和生态学意义。鉴于上述原因，本论文针对一种采囱中国南海涠洲岛珊瑚礁的海葵(∞址6)样品的共附生微生物进行分离培养，重点分离鉴定了48株海葵共附生真菌，发现这些菌株涉及2门(Basidiomycota、AsGo檄y∞ta)，嚣嚣(Cap致odiales、豫chospha毹舔es、Pleospo蕊es、H弹ocreales、E疆。缸蕊es、Ag积

3、cales、Diapo地ales、Xyla砖alos)，21个属(锄如妒D疗铭拂Sp．、娩唧移煅。鳓esp．、戳D珑9矽溶sp。、旯舔口以甜礅sp．、却r协8溉凇蕊鲫s等>。分析其种群多样性，并筛选其抑菌活性，发现7株真蔼C铴幽印。以“磁印．(融墟6—2，驰墟6—6，瞄。26—61)，聊p。煳sp．(曩心6—9)，么Zf8蹦穗肮z蹲。(研垅6．16，尉控6．37)，互泌e砌z融m蹲。(融垃6—20)在lmg触L时对9株敏感指示翦表现出很强的选择搏制作用，与阳性对照环丙沙星(20蒯)作耀相当。选择一株具有强抑菌活性的海葵共附

4、生真菌(婀g阳妒。臌Sp。王A26—9)进行活性次级代谢产物的研究。综合运用硅胶柱层析、凝胶柱层析、半制备高效液相色谱等分离手段，从其发酵液以及菌体粗浸膏中分离鉴定了lS个单体化合物，通过NMR，MS，取巩X。哪等波谱学技术鉴定了它们的结构，包括蒽醌类一种南海海葵中共附生真菌的分离鉴定和一株真菌活性次级代谢产物的研究(1一10)、倍半萜(11)及甾体(12—15)，其结构分别为4a-印f-9a-metlloxydihydrodeoxybos呼in(1)，10一deoxybostrycin(2)，Ni铲osporinB(3)

5、，9a-hydroxydihydrodesoxybos妇眵cin(4)，9a-hydroxyhaloroselliniaA(5)，4-deoxybostrycin(6)，bos奶，cin(7)，3，5，8一trihydroxy·7一metlloxy-2·methylall吐Hacene．9，1O．dione(8)，austrocortimbin(9)，化合物10，c旭臼Ⅵ行s—abscisicacid(11)，(22E，2被)．cerevisterol(12)，(24S)-24一memyl—5a—ch01estane·7，

6、22一diene一3B，5一diol(13)，(22E，24R)一24一methyl一Sa—cholesta一7，22一diene一3B，5a—diol(14)，ergostaperoXide(15)，其中1、2、10为新化合物，化合物1的结构进一步得到晶体结构的确认，并通过单晶数据确定了其绝对构型为2S3R，9R，1啦4出。为研究蒽醌类化合物的构效关系，还对分离获得的葸醌类化合物(1—9)以及通过化学反应获得的9个新衍生物(6a、7a、8a一8f、9a)和1个已知衍生物(89)进行了抑菌活性的评价。结果表明，化合物2、3

7、、6a表现出很强的抑菌活性，其抑制作用与阳性对照环丙沙星效果相对甚至更强。其中，化合物2对占．s甜6ff凰的MIC值为625nM，化合物3对B．s“6行凰、B．ce厂e“s的MIC值均为312nM，而环丙沙星对这两株细菌的MIC值分别为312、1250nM；化合物6a对B．ce，．P“s活性最强，为环丙沙星的25倍，其MIC值为48．8nM。氢醌类化合物具有很强的抑菌活性，是海葵共附生真菌坳spDmsp．中的主要抑菌活性代谢产物。在海葵共附生真菌间相生相克关系的研究基础上，选择两株共附生真菌(TA26．33和TA26—46

8、)进行共培养，从固体培养基甲醇浸泡粗浸膏中追踪分离得到3个大环内酯类化合物(16_18)，分别为paecilomycinF(16)，LL—Z1640．1(17)和zeaenol(18)。与真菌TA26—46单独培养时相比，化合物16在共培养时产量发生明显变化。抑菌活性研究表明，化合物16对B．s“施凰，