复方苦参注射液对ｐｃ－３细胞凋亡的影响

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1、复方苦参注射液对ＰＣ－３细胞凋亡的影响目的：研究复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法：用复方苦参注射液对体外培养的人前列腺癌PC-3细胞进行药物处理，采用MTT比色分析法测定复方苦参注射液不同剂量组对PC-3细胞生长的调控作用；采用流式细胞仪分析复方苦参注射液对PC-3细胞周期分布的影响。结果：复方苦参注射液可抑制PC-3细胞的增殖，诱导其凋亡，改变细胞周期分布，使G0/G1期PC-3细胞比例增高。结论：复方苦参注射液可诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。

2、　　关键词]复方苦参注射液；PC-3细胞系；流式细胞术　　中图分类号]R962文献标识码]A1673-7210（2008）10（a）-028-02　　　　近年来，随着工业的发展，环境污染日益加重，肿瘤的发病率日益增高，手术治疗是早期肿瘤治疗的主要方法，但大多数患者就诊时即为晚期，失去了手术治疗的最佳时机，对于不能手术切除病灶的中晚期患者，尤其对于老年肿瘤患者，化疗的不良反应严重，难以耐受。现在，中药抗癌作用受到越来越广泛的关注，本研究旨在通过实验研究，探讨复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。

3、　　1材料和方法　　1.1试剂和仪器　　人前列腺癌细胞PC-3(购自上海麦莎生物公司)，复方苦参注射液(购自山西振东制药有限公司)，羊抗鼠FITC-IgG抗体(美国Sigma公司)。冷冻离心机，CO2培养箱，流式细胞仪。　　1.2方法　　1.2.1PC-3细胞的培养将购买的细胞培养于RPMI-1640培养基中(其中添加10%小牛血清，100U/mL青霉素和100g/mL链霉素)，细胞传代使用0.125%胰蛋白酶消化，每2天换1次培养液。当细胞培养至一定规模时，用胰蛋白酶消化获得细胞，用PBS多次洗涤，分别

4、以每孔2104个将细胞接种到96孔板中，以每孔1.5105个接种到24孔板，细胞接种后继续培养24h，然后用于不同的实验。　　1.2.2PC-3细胞增殖抑制检测(MTT)细胞接种至96孔板24h后加入复方苦参注射液使其浓度分别为300、150、75、35、18.75μl/ml，设不加复方苦参注射液的阴性对照和不接种细胞的空白对照。37℃下置于CO2培养24、48、72h，每个浓度每个时点接种3孔。每24小时换液，于终止前4h，每孔加入5%MTT，继续孵育4h后弃上清液，每孔加二甲基亚砜100μ

5、l，于490nm波长处在荧光酶联分析仪上测光吸收值(A值)，求平均值，计算抑制率。抑制率=(1-实验组平均A值/对照组平均A值)100%。　　1.2.3流式细胞术细胞接种24孔板培养24h后换液，实验组加入复方苦参注射液使其终浓度分别为300、75、18.75μl/ml，设不加药对照组（0μl/ml）。每24小时换液，孵育48h后收获细胞，吹冲成细胞悬液，PBS洗涤，1200r/min离心5min，弃上清，加入PBS制成细胞悬液(细胞计数＞105个/ml)，加入70%冷乙醇固定。4℃下置于PI

6、染液暗室孵育30min，流式细胞仪检测DNA二倍体。　　1.2.4统计学方法应用SPSS10.0软件，采用方差分析及SNK两两间检测。　　2结果　　2.1复方苦参注射液对PC-3细胞增殖的抑制作用　　不同浓度处理组分别培养24、48、72h，MTT法测定细胞生长情况，计算抑制率。复方苦参注射液对PC-3细胞增殖具有抑制作用，其作用具有时间和剂量依赖性，差异有显著性(P<0.05)。48h抑制最为显著，72h抑制率下降，见表1。　　　　2.2复方苦参注射液对PC-3细胞凋亡的影响　　流式细胞仪检测细胞

7、凋亡。每个样品计数1105个细胞，不同浓度处理组均可见一DI(DNA指数)＜0.19的亚二倍体峰，经MultiCycle软件分析，确认为凋亡峰，其面积随药物浓度增加而增加，且差异极具显著性(P＜0.01)。复方苦参注射液浓度为300、75、18.75、0μl/ml时诱导细胞的48h后的凋亡率分别为（20.63±1.15）％、（14.26±1.19）％、（10.73±1.11）％、（2.07±1.03）％。　　2.3复方苦参注射液对PC-3细胞周

8、期影响　　流式细胞仪检测不同浓度处理组的细胞周期分布，复方苦参注射液诱导PC-3细胞G0/G1期细胞比例增高，S期、M期细胞比例降低，其作用具有剂量依赖性，且差异具有显著性(P<0.01)，见表2。　　　　3讨论　　肿瘤发生的基础是细胞生长和凋亡失调，由于细胞紊乱，从而导致肿瘤的发生。复方苦参注射液依据中医扶正祛邪原则组方，由苦参、冬虫夏草等多味中草药提取而成，临床主要用于抗肿瘤、缓解癌疼痛等1，2]。研究表明，复方苦参