辛伐他汀对sh

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1、辛伐他汀对SH【摘要】　　目的：研究胆固醇降解药辛伐他汀（Simivastatin）对SH-SY5Y神经细胞中胆碱能神经的刺激作用，探讨史他汀类药物在神经退变性疾病中的神经性保护机制。方法：体外培养SH-SY5Y神经细胞（源于人神经母细胞瘤细胞），在培养液中加入辛伐他汀培养48h，然后用比色法测定细胞MTT还原率及胆碱酯酶活性，用蛋白印迹方法测定尼古丁受体α7和α3蛋白水平，RT-PCR方法测定该类受体mRNA表达水平。结果：辛伐他汀能降低培养细胞中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性（分别降低41.9%和18.1%）；增强尼古丁受体α7亚单位的蛋白和mRNA表达水平（分别升高23%和3

2、2%），但对α3无明显影响。结论：辛伐他汀可以刺激胆碱能神经系统，可能具有神经性保护作用。【关键词】辛伐他汀；胆碱酯酶类；尼古丁受体；SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞　　［Abstract］Objective:Toinvestigatetheeffectofsimivastatinoncholinergicnervesystemandtounderstandneuroprotectivemechanismsofthedruginneurodegenerativediseases.Methods:SH-SY5Ycells(humanneuroblastomacellline),ivas

3、tatinfor48hr.TheMTTreductionandcholinesteraseactivityeasuredbyusingphotometricmethod;theexpressionsofnicotinicacetylcholinereceptor(nAChR)subunitsα7andα3atproteinandmRNAlevelsivastatininhibitedtheactivitiesofacetylcholinesteraseandbutyrylcholinesteraseby41.9%and18.1%,respectively,inthecultured

4、cells.ThedrugincreasedtheexpressionsofnAChRα7atbothproteinandmRNAlevelsby23%and32%,respectively;hoivastatincanstimulatethecholinergicnervoussystemandmayplaycertainneuroprotectiveeffects.　　［Keyivastatin;cholinesterases;receptors,nicotine;SH-SY5Ycells史他汀类药在临床主要用于降低体内胆固醇水平，治疗高血压病。近年的研究表明，胆固醇水平升高和

5、代谢改变与神经退变性疾病（如阿尔茨海默氏病和帕金森氏病）的发生有密切的关系[1]。β淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病机制中的关键物质之一。已发现高胆固醇可增强β分泌酶的活性，使β淀粉样蛋白前体蛋白分解产生β淀粉样蛋白增多；降低胆固醇水平可使α分解酶活性增强，而减少β淀粉样蛋白的生成[2]。史他汀类药物通过降低胆固醇合成来缓解阿尔茨海默病的发生率；另外，史他汀类药物还通过非胆固醇依赖性的作用来发挥作用，但其在阿尔茨海默病发病中的神经保护作用机制仍不十分清楚[3]。为此，本研究用体外培养的神经细胞，研究辛伐他汀（Smivastatin，史他汀类药物的一种类型）的神经保护作用机制。　　1材料

6、与方法　　　　　1.1材料　　源于人脑的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞）购于GermanCollectionofMicroorganismsandCellCultures公司（德国），辛伐他汀购于PfizerLaboratories公司（美国），尼古丁受体α7和α3亚单位引物由瑞典GenBankAccession公司合成，羊抗α7和α3、鼠抗β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗羊及抗鼠二抗购自SantaCruzBiotechnologyInc（美国）；D-MEM培养液购自GibcoIntrovagen公司（英国），胆碱酯酶测定试剂硫代乙

7、酰胆碱（ATC）、硫代丁酰胆碱(BTC)、5，5’-联硫代-双-2-硝基苯甲酸（DTNB）、BPA（BuChE的抑制剂），均购自Sigma公司；RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒购自Ambion公司。　　1.2细胞培养和处理　　用含有15%胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的D-MEM培养液培养SH-SY5Y细胞，培养箱中含5%CO2，温度为37℃。在含SH-SY5Y细胞的培养液中加入不同浓度的辛伐他汀，培养期为48h。　　1.3测定方法　　MTT