抑转丸对lewis肺癌瘤株转染的c57bl-6小

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1、抑转丸对Lewis肺癌瘤株转染的C57BL/6小［摘要］目的探究抑转丸对Lel和1.2g/ml混悬液；兔抗小鼠CD44V6单克隆抗体（BA0454），兔抗小鼠CD4单克隆抗体（BA0430），S-P试剂盒（武汉博士德生物工程公司）；Buin’s液（自配）。1.3主要仪器解剖显微镜（日产Olympus）、电子天平（上海第二分析仪器厂）、超净工作台（guard型，德国）、水平离心机（LD4-2型，北京医用离心机厂）、γ计数器（MH-01型，中创集团北京民华科技公司研制，中国同位素公司监制）。1.4方法1.4.1模型复制［1］将肺癌荷瘤小鼠脱颈处死，放入75％酒精中浸泡10min，在超净工作台上分

2、离瘤体，取其中生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水冲洗后剪碎，经0.25%胰蛋白酶室温下消化5min，用组织匀浆器研磨肿瘤组织制成匀浆过300目尼龙网制成单细胞悬液，用生理盐水调整细胞浓度至1×107/ml，0.2%台盼蓝染色，在倒置显微镜下计算活细胞数，即未染色的细胞数>95％，在每只小鼠右腋皮下接种瘤细胞悬液0.2ml。1.4.2分组接种瘤组织前把40只小鼠随机分成4组：空白对照组（A组），荷瘤对照组（B组），抑转丸小剂量组（C组），抑转丸大剂量组（D组）。4组动物分笼喂养。适应性喂养1周后，B、C、D组接种瘤细胞悬液，并于24h后开始灌胃给药：A、B组用生理盐水0.2ml/（只

3、·d），C、D组分别用浓度为1.2g/ml、3.6g/ml的抑转丸混悬液0.2ml/（只·d），共灌胃21天。2检测项目与方法2.1测移植瘤重，计算抑瘤率处死动物后，剥离移植瘤体，电子天平称重，计算抑瘤率；石蜡包埋，连续切片，厚度约4μm。抑瘤率（%）＝（对照组瘤重－用药组瘤重）／对照组瘤重×100％。2.2观察肺转移数，计算肺转移抑制率方法同上，取血后颈椎脱臼处死小鼠，剥离小鼠肺脏，用电子天平称重，Buin’s液固定，并计算肺转移结节数，计算肺转移抑制率。2.3CD44V6检测2.3.1检测方法［2］用S－P法，将石蜡切片脱蜡至水化，3%过氧化氢室温孵育10min，消除内源性过氧化物酶的活

4、性，蒸馏水冲洗3次，每次2min，PBS液浸泡5min，将切片放入盛有枸橼酸盐缓冲液的容器中加热，使容器内液体温度保持在92℃~98℃，并持续15min，10%正常血清（PBS液稀释）封闭，室温孵育10min，倾去血清，滴加1∶75的CD44V6抗体4℃冰箱过夜，PBS冲洗3次，每次5min，滴加生物素标记的二抗工作液，37℃湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次5min，滴加适量辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素工作液，37℃湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次15min，DBA显色剂显色，显微镜下观察10min，适时终止反应，自来水冲洗，苏木素复染，脱水透明，中性树脂胶封闭。2.3

5、.2对照阴性对照以PBS取代一抗，阳性对照为已知的阳性片。2.3.3CD44V6结果测定［3，4］以细胞膜呈棕黄色为阳性，随机计数5个视野，根据阳性细胞所占比例分为阴性（－）：即阳性细胞数<5％；阳性（＋）：即阳性细胞数≥5％。2.4统计学方法试验结果数据均用均数±标准差（x±s）表示，统计学处理分别用χ2检验和t检验。3结果用药后观察小鼠一般情况，4组小鼠移植瘤均存活并生长，用药过程中各组小鼠活动正常，反应灵活，无毛色枯槁、腹泻、消瘦等，空白组与荷瘤组各1只小鼠在灌胃过程中死亡，尸检为液体灌入气管窒息所致。3.1各组出瘤时间比较见表1。C组和D组的出瘤时间分别与B组比较差异均具有非常

6、非常显著性（P<0.01），C组与D组的出瘤时间比较差异无显著性（P>0.05）。表明：大、小剂量YZP组与荷瘤对照组相比较均能明显延长C57BL／6小鼠的出瘤时间，大剂量YZP与小剂量YZP延缓出瘤时间的作用无差异。表1各组出瘤时间的比较注：C组、D组与B组对比，*P<0.01；D组与C组对比，△P>0.053.2各组间移植瘤重测量见表2。C、D组分别与B组的移植瘤重比较，差异有显著性（P<0.05），C与D组的移植瘤重相比较，差异无显著性（P>0.05）。说明大、小剂量YZP对Lewis肺癌的生长均有抑制作用，而大剂量YZP对Lewis肺癌生长的抑制作

7、用与小剂量YZP相比较无差异。表2各组间移植瘤重的比较注：C组、D组与B组比较，*P<0.05；D组与C组比较，△P>0.053.3各组肺转移灶个数的观察见表3。C、D组与B组的转移灶个数比较，均差异有显著性（P<0.05），D组与C组的转移灶个数比较，差异无显著性（P>0.05）。表明大、小剂量YZP均能阻抑肺癌的自发转移，大剂量YZP对肺转移的阻抑作用与小剂量YZP无差异。表3各组