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1、小儿急性淋巴细胞白血病与HLA基因多态性相关性的【摘要】目的:对小儿急性淋巴细胞白血病患者进行HLA基因多态性分型,寻找急性淋巴细胞白血病的易感基因。方法:采用特异性寡核苷酸探针杂交（PCR/SSO）法,对儿童急性淋巴细胞白血病患者和健康对照组进行HLAA、B、DRB1基因分型。结果:在儿童急性淋巴细胞白血病患者中HLAA01、A02、HLADRB1*01、HLADRB1*15基因位点较对照组明显升高（P<0.05）。A11、A33、HLADRB1*03基因位点频率较对照组降低（P<0.05）。其中HLAA01、H
2、LADRB1*01、HLADRB1*15基因位点相对危险率RR>4,而A11、A33、HLADRB1*03基因位点相对危险率RR<1。结论:HLAA01、A02、A33、HLADRB1*01、DRB1*03、DRB1*15与小儿急性淋巴细胞白血病有相关性。其中HLAA01、HLADRB1*01、HLADRB1*15对儿童白血病有遗传易感性。A11、A33、HLADRB1*03则对青海地区汉族小儿急性淋巴细胞白血病的发生有拮抗作用。【关键词】HLA急性淋巴细胞白血病相关性SSO/PCR 不同患者对白血病的易感
3、性及免疫功能不尽相同［1］。具有高度多态性并与抗原提呈和识别有关的人类白细胞抗原（HLA）分子,可能是导致白血病的重要遗传因素之一［2］。采用SSO/PCR（序列特异性寡核苷酸探针）的方法对青海地区汉族38例小儿急性淋巴细胞白血病患者和35例健康对照进行了HLA基因分型,探讨HLA与白血病的相关性。 1材料和方法 1.1材料DNA提取试剂盒购自QIAGEN公司;HLA分型试剂盒为英国DymalRELITMSSO产品。我院自2002～2005年收住的青海地区汉族小儿急性淋巴细胞白血病患者38例,按FBA诊断标准确诊,年龄在2～15岁,平
4、均年龄6岁。其中男21例、女17例。按照随机原则,抽取与白血病患者无亲属关系的35例志愿者为对照组。白血病患者和对照组均抽取外周血4mL经EDTA抗凝。放置-20℃冰箱备用。 1.2方法 1.2.1基因组DNA的提取采用DNA提取试剂盒,从全血中提取基因组DNA。严格按照说明书进行操作用紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度,当A260/280值在1.6～1.8时,表明DNA纯度较高,放置于-20℃冰箱备用。 1.2.2等位基因HLAA、B及DRB1分型采用PCRSSO方法,用HLA分型试剂盒。分别用不同的引物,对具有高度多态性
5、的HLAA、B位点的第2、第3外显子和DR位点的第2外显子上的DRB1、DRB3、DRB4及DRB5基因进行扩增,将扩增产物变性使其成为单链,加入到含有序列特异性寡核苷酸探针的尼龙薄膜上,使生物素标记的扩增产物与膜上的探针结合,通过链霉亲和素-辣根过氧化物酶与其反应,再用H2O2,和四甲基联苯胺显色后,记录探针杂交的情况。通过相应的分析软件,得出该样本的HLA基因型别,具体操作方法参照.tissuetyping.(DynalRELITMSSOHLAtest)。 1.2.3统计学分析HLA各位点的基因频数用直接记数法,基因频数=各位
6、点的阳性数/本组出现的基因总数。根据数据特点采用四格表χ2检验,经SPSS11.0统计软件进行统计处理。P<0.05时计算该位点与疾病发生的相对危险率。相对危险率(RR)=P+×C-/P-×C+,式中P+为患者组具有某种基因的位点数,C-为对照组不带此基因的基因位点数。P-为患者组不具有某种基因的位点数,C+对照组带此基因的基因位点数。若RR值>4,则认为该位点是疾病发生的危险因素;若RR<1,则认为该位点在疾病发生过程中起保护性作用。1 2结果 2.1等位基因HLAA基因频率的比较HLAA基因共出现11个位点,
7、基因频率见表1一在35例正常对照组的HLAA等位基因中,A11、A30及A33等位基因的频率较高;而A01、A02、A23等位基因的频率较低,在38例白血病患者的HLAA等位基因中,A01、A02、A24等位基因的频率较高;而A11、A23、A33及A34等位基因的频率较低其中A01、A02等位基因的频率明显高于正常对照组(P<0．05);A11、A33等位基因的频率明显低于正常对照组(P<0.05),其他组别差异无统计学意义。 表1HLAA基因位点与白血病相关性研究的统计表（略） aP<0．05vs对照组.R
8、RA01=10.20,A01为儿童白血病发生的危险因素.RRA02=3.13,尚不能认为与儿童白血病发生有关.RRA11=0.25,RRA33=0.21.A11和A33在疾病发生过程中起保护性
