hbv基因定量分析技术的应用价值、存在问题及展

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1、HBV基因定量分析技术的应用价值、存在问题及展HBV基因定量分析技术的应用价值、存在问题及展望--HBV基因定量分析技术的应用价值发布时间：2003-8-12：缪晓辉孔宪涛近年来HBV基因定量分析的价值受到越来越多研究者的重视[1]。过去由于过分强调了HBV感染后过强的细胞免疫应答介导肝细胞损伤，忽视了对病毒复制水平与致病性之间因果关系的研究。目前普遍认为，尽管HBV不直接破坏寄生细胞，但病毒的活跃复制是启动或激发肝脏组织炎症反应的因素。这表明确定感染者体内HBV复制状态，即从HBV基因定量的角度作病情分析是

2、十分有意义的。事实上，真正引起人们关注HBV基因定量分析价值的重要原因是最近发现了干扰素治疗与HBV基因水平两者之间有非常密切的关系。HBV基因定量分析还在转基因动物、基因治疗、蛋白疫苗和核酸疫苗、抗HBV药物体外试验和动物试验及耐药研究、流行病学研究、HBV血液制品污染监测等方面具有重要的应用价值。一、HBV基因定量分析在干扰素治疗中的应用尚无药物可以清除所有HBV感染者体内HBV颗粒。干扰素是目前唯一有一定疗效的一类生物制剂[2],它在病毒等诱导下由几种相关细胞产生，并发挥抗病毒作用。但是无论使用何种干扰

3、素，也无论治疗剂量或疗程如何，干扰素治疗后HBV转阴率迄今仍保持在40%左右，无法进一步提高，究竟有哪些制约因素起作用尚无定论。近年来发现干扰素的治疗效果，即干扰素治疗后的反应性(response)很大程度上取决于HBV在体内的复制水平[2,3]。以下几点事实值得注意:⑴治疗前HBV低水平复制者的反应性明显优于高水平复制者。HBV转阴的几乎都是那些治疗前血清HBVDNA含量较低者，而治疗前HBVDNA含量特别高者大多没有疗效；⑵治疗中病毒复制水平迅速降低者，有望治愈。相反，治疗期间HBV基因水平下降较慢，或下

4、降幅度较小，或变化不明显者，大多是无效者；⑶治疗结束后，采用PCR定量法检测，HBVDNA完全转阴者可能不再复发，而终止治疗后HBVDNA仍保持较低水平者，反跳的可能性较大。可见，使用干扰素治疗HBV感染时，在各种近期和远期疗效指标中，除了病人的临床表现是否好转，生化指标(ALT)是否改善，肝组织炎症反应是否减轻等以外，血清HBVDNA定量分析是一个十分重要的观察项目。从现有研究资料看，除病理检查外，HBVDNA定量检测，也许是干扰素治疗效果判断依据中最直接、最可靠和最有价值的指标。多数研究者认为，通过HBV

5、DNA定量分析来指导干扰素治疗，有重大意义。首先，在治疗对象的选择方面，即确定干扰素治疗适应症时，应对各侯选病例在某个时间段内定期反复检?釮BVDNA水平，那些长期保持HBV高复制水平者不宜接受干扰并素治疗，或应当联合治疗；其次，干扰素治疗期间，可根据HBV基因水平的动态变化适时调整治疗剂量，决定是否缩短或延长疗程，及是否终止治疗。这不仅对制订合理的治疗方案，也对减轻病人负担，避免不恰当用药有指导意义[4]。笔者认为，目前国际上普遍采用的所谓“六个月疗程”及某些中高剂量治疗方案均缺乏充分和足够的立论依据，有必

6、要结合基因定量分析结果，重新评价和制订干扰素治疗计划；最后，干扰素治疗结束后，对有反应者定期作定量分析，有助于发现复发者，并根据血清HBVDNA含量波动情况决定是否实施再治疗。有人报告，首次干扰素治疗有效者，再治疗的效果亦佳。如果第一次治疗无反应或反应较差者，第二次干扰素治疗仍不能取得理想疗效[5]。（ll，移植后不间断地采用HBsAb免疫预防，随访36个月，无一例再发肝炎，但另外两例移植前病毒拷贝数大于105/ml则发生了严重HBV再感染。建议移植前使用抗HBV药物，最大限度降低血清HBVDNA浓度，有助于

7、防止HBV侵犯移植后肝脏，提高肝脏移植的效果。㈣前核基因突变HBV定量意义HBV前核基因突变可导致HBeAg表达缺失。感染不表达HBeAg的HBV突变株，或野生型HBV在体内突变并成为优势株均产生较严重的后果，如易发生暴发性肝炎，预后差，干扰素治疗无效等[9,10]。目前已能采用核酸序列测定技术、PCR技术、限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术等来定性检测HBV前核基因突变。最近Baxall建立了一种PCR及产物的显色反应点突变分析技术(Colourimetricpointmutationassay)，用

8、来定量分析突变前核基因，有助于进一步探讨HBV突变与致病性之间的关系[11]。基因定量分析是一项临床应用型技术，但对基础研究也有一定的应用价值[12]，尤其是在当前基因治疗、转基因动物、核酸疫苗等热点研究领域，基因定量分析可能是一种很好的辅助手段，对发现一些有意义的现象也许有一定帮助。比如HBV在转基因小鼠组织脏器分布规律可用定量标准来衡量，以及用定量手段观察各种药物、细胞因子和其它物质对转基因小鼠