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1、尼帕病毒(Nipahviris-->导语：本文以阳性质粒做阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测,建立检测NiV的FQ-RT-PCR方法，根据NiVN基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。采用RT-PCR结合荧光定量PCR(FQ-PCR)检测了112例可能与病毒感染有关的神经系统(NS)疾病患者和82例健康人、150头猪的外周血液单个核细胞(PBMCs)的NiVN基因片段,对阳性PCR产物进行纯化、克隆后进行测序,并进行氨基酸测序,分析NiV感染的流行病学特点，探讨尼帕病毒(Nipahviri
2、s,NiV)在贵州遵义及周边地区的流行状况。由本站代写硕士论文中心整理。前言NIV(Nipahvirus，NIV)是一种新发的人畜共患性疾病病毒，最初是从马来西亚名为尼帕村的一名脑炎患者的脑脊液中分离出来的，因而得名川。NIV属于副粘液病毒，为单股负链RNA病毒，不分节段〔2〕。与1994年在澳大利亚发现的亨得拉病毒(Hendravirus)在核酸序列上有84%的同源性，但与副粘液病毒科的其他病毒有很大的不同，二者构成了副粘液病毒的一个新的HenipaviruS亚属〔划。1998~1999年，马
3、来西亚的猪群大规模暴发NIV(Nipahvirus，NIV)感染，并导致265人感染NIV，其中105人死亡;此后，在东南亚和南亚许多国家的动物和人群中都先后多次短暂暴发流行。Niv的宿主比较广泛，ehuaKB等〔5，的研究表明Niv自然宿主为pteropidbats(一种果蝠)，猪、狗、猫、马和鼠类等以及八哥、九宫等掠鸟类动物通过接触或食用被尿液或者唾液污染过的食物而感染〔6〕，人感染NIV主要是通过中间宿主猪而感染的，也有人传染人的报道。猪感染后的临床表现主要为急性呼吸窘迫综合症，很少涉及到
4、NS，且发病率高，死亡率低图。人感染后的临床症状主要表现为急性脑炎综合症，大约有40%是致死性的急性脑炎，体征主要涉及到脑干及高颈髓;许多病人(40%)同时伴有呼吸系统性疾病〔’。〕。人感染NIV后病死率达(40一70)%，因此，NIV被列为最危险的生物安全4(P一4)级病原〔’门。贵州地区与东南亚和南亚相邻，具有有利于该类病毒传播的自然地理条件;此外，随着我国与这些国家和地区之间的商贸往来日益频繁，NIV传入我国的可能性逐渐增大。近年来我院收治的可能与中枢神经系统感染有关的疾病不断增多，如不明
5、原因的病毒性脑炎(viraleneephalitis，VE)，多发性硬化(multipleselerosis，MS)，帕金森氏病(parkinson’5disease，PD)，急性脊髓炎(aeutemyelitis)，无明显原因的精神行为异常等患者，其中某一些病例是否由NIV感染所致?它们的临床特征及流行情况怎样?为此我们采用一步法实时逆转录聚合酶链式反应(RT一PCR)结合荧光定量PCR(FQ一PCR)方法对遵义地区可能与神经系统感染有关的疾病患者和猪的外周血PBMCs进行NIVN基因检测。旨
6、在①确定贵州省遵义地区人群和猪群中是否存在NIV感染;②分析NIV在贵州遵义及周边地区的流行特点，Niv感染后的临床特征，为NIV在我国的流行状况的研究打下基础。材料和方法1研究对象:112例可能与病毒感染有关的NS疾病患者均系我院神经内科2007年9月一2008年12月的住院患者，通过临床表现、血液常规、生化检测及细胞学检查、脑脊液检查、脑电图及影像学等检查，并除外结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎、单纯疤疹病毒性脑炎、乙型脑炎、EB病毒感染性脑炎等特异性颅内感染及脑白质病变、中毒性脑病、代谢性脑病等
7、疾病。其中男58例，女54例，年龄14一80岁，平均年龄36士16.8岁。其中，病毒性脑炎患者78例，急性脊髓炎患者8例，多发性硬化患者12例，帕金森氏病患者8例，运动神经元病、无明显诱因的精神异常，各3例。其中有明确的猪、牛、羊、马等动物接触史者76人。健康人对照组:82例，其中男48例，女34例，年龄18~65岁，平均年龄36士14.7岁。实验组和对照组一般情况差异无统计学意义。猪均来自贵州遵义及周边地区5个猪屠宰场，每个屠宰场随机抽取猪外周血液30份，共计150份。2主要试剂及仪器-->7
8、1.[11]NegreteOA,ChuD,AguilarHC,etal.SingleaminoacidchangesintheNipahandHendravirusattachmentglycoproteinsdistinguishephrinB2fromephrinB3usage.JVirol,2007,81:10804-10814.[12]Torres-VelezFJ,ShiehungallBA,SchopmanNC,LambethLS,etal.InhibitionofHenipaviru
