依达拉奉联合pp2对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

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1、依达拉奉联合PP2对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用1.徐州医学院附属医院麻醉科江苏徐州221002;2.江苏省肿瘤生物治疗研宄所江苏徐州221002摘要：目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后PP2和依达拉奉联用对大鼠脑损伤的保护作用。方法选用雄性大鼠150只，体重250-300g,除假手术组外，其余各组均采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。造模成功后随机分为7组，每组18只：假手术组(Sham组)，缺血再灌注组(I/R组)，溶剂对照组(DMSO组)，生理盐水组(NS组)，PP2组，依达拉奉组(MCI-186组)；联合用药组(Co-drug组)。处理2

2、4h后断头取脑，观察大鼠脑梗死面积，检测MDA、SOD含量，用TUNEL法检测脑组织缺血半暗带的凋亡，用Westernblot方法检测激活的Caspase-3蛋白的表达。结果与I/R组相比，PP2组、MCI-186组及Co-drug组梗死面积有显著减少(P<0.05),Co-drug组梗死面积减少最为明显(P<0.01)；与Sham组比较，I/R组、PP2组、MCI-186组的MDA升高(P<0.05)、T-SOD降低(P<0.05);与I/R组比较，PP2组、MCRL86组及Co-drug组的MDA降低(P<0.05),

3、SOD升高(P<0.05),TUNEL结果显示,与Sham组相比，I/R组、PP2组、MCI-186组均使得脑组织损伤，Caspase-3表达增加；与I/R组相比，PP2组、MCI-186组、Co-drug组均使得脑组织损伤减轻，Caspase-3表达降低。结论Co-drug组比单药组更为有效，联合PP2和依达拉奉联用能够明显的改善大鼠脑缺血再灌注造成的损伤。关键词：Src激酶；PP2;依达拉奉；脑缺血再灌注损伤临床上常用溶栓来治疗缺血性脑卒中，然而脑组织缺血再灌注时产生的损伤要远远大于木身缺血对脑组织的伤害。一直以来，人们在寻找着减少脑组织缺血

4、再灌损伤的有效措施。研究证明在脑缺血组织中，Src激酶表达异常上调[1],而Src激酶抑制剂PP2可以通过减少凝血酶对Src激酶的激活、减轻兴奋性氨基酸介导的兴奋毒性、使VEGF和基质金属蛋白酶介导的血管通透性改变，以及细胞因子介导的炎症反应等［2］来减轻对脑组织的损伤作用［3-4］。另外，氧自由基增多、一氧化氮含量上升产生的神经毒性等也是对脑损伤的重要因素。在脑缺血再灌注中，Caspase-3表达异常升高在脑缺血再灌注损伤介导的细胞凋亡中扮演着执行者的角色。许多研究证明依达拉奉是较好的脑缺血再灌注后处理过程中较好的氧自由基清除剂［5-6］。本文将建立

5、大鼠脑缺血再灌注模型，观察PP2联合依达拉奉后处理对大鼠脑的保护作用，以及探讨相关机制。1材料与方法1.1材料1.1.1动物选择雄性Sprague-Dawley（SD）人鼠由徐州医学院实验动物中心提供。1.1.2试剂及药品2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3，5-triphenyltetrazolium,TTC）、DMSO购自美国Sigma公司，依达拉奉注射液购自南京先声药业有限公司，PP2购自美国Calbiochem，Merck公司，TUNEL试剂盒购自美国Roche公司，Caspase-3一抗购自美国cellsignaling公司，兔抗大鼠二抗购自

6、南通碧云天生物技术研究所，HRPSubstratePeroxideReagent购自美国MIUJPORE公司，MDA、T-SOD试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2方法1.2.1脑缺血模型的制备及分组选择健康雄性SD人鼠150只，10~14周龄，体重250〜300g，用改良Longa线栓法［7］经从右侧颈总动脉插线，栓闭塞右侧大脑中动脉，于2h后拔出线栓制作缺血再灌注模型。大鼠造模清醒后进行Longa评分［7］。得分为1〜3分大鼠共126只纳入实验，并用随机数字表法分入对照组和各干预组，每组18只。再选择18只为假手术组，除不插线栓及药物干预外，其

7、他步骤同I/R组。各组均于手术后24h断头取脑。采用随机数字表法，将大鼠随机分成7组（n=18）:假手术组（Sham组），缺血再灌注组（I/R组），溶剂对照组（DMSO组），生理盐水组（NS组），Src激酶抑制剂组（PP2组），依达拉奉组（MCI-186组）；联合用药组（Co-drug组）。干预措施除Sham组和I/R组以外，各组均在复灌6h后给予药物干预：DMSO组给予脑室注射5μlDMSO。NS组给予腹腔注射等容量的NS注射液，PP2组给予脑室注射PP215μl·10μl-l(5μl),MCI-186组给予依达

8、拉奉注射液腹腔注射3mg·kg-l；Co-drug组给予脑室注射PP215&mu