血清线粒体dna在急性阑尾炎诊断中的应用

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1、血清线粒体DNA在急性阑尾炎诊断中的应用代斌李强唐一丁(成都市龙泉驿区第一人民医院普外二科四川成都610100)【摘要】目的：评估血清线粒体DNA(mtDNA)在急性阑尾炎(AA)诊断中的价值。方法：纳入拟诊AA患者164例及健康对照38例，采集外周静脉血，检测白细胞计数(WBC)和C反应蛋白数值(CRP)、血清mtDNA水平。比较确诊AA患者与健康对照及非AA患者上述指标差异，并通过受试者工作曲线(ROC曲线)分析上述各指标诊断AA的效能。结果：AA患者上述指标显著高于健康人和非AA患者(P<0.05)。ROC曲线分析显示，WBC、CRP和mtDN

2、A的曲线下面积分别为0.776、0.884和0.943。mtDNA诊断AA的灵敏度为0.911，特异度为0.926。结论：mtDNA可能参与AA的发生发展过程，诊断效力高于WBC和CRP,可作为诊断AA的辅助指标，未来可能在临床推广。【关键词】急性阑尾炎；线粒体DNA;ROC曲线；诊断【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2016)19-0147-03急性阑尾炎(acuteappendicitis，AA)是普通外科常见急腹症之一，各个年龄段均易感，总体患病率约7%［1］。急性阑尾炎的诊断主要依赖于症状体征和常规临床检查手段，

3、如白细胞计数(WBC)、C反应蛋白和影像学检查(彩超、CT等)［1］。虽然临床有诸多手段可以诊断急性阑尾炎，但上述诊断方法仍不能达到完全准确诊断AA的效果。据文献报道，阑尾切除术中的无炎症阑尾比例高达5〜40%;而漏诊AA导致手术时机推延可引起5〜30%阑尾穿孔。所以，迫切需要一种新的方法来辅助诊断AA。线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)是一种新发现的内源性致炎因子，其释放入血可引起典型的全身炎症也反应；同时,mtDNA也可以作为有效的指标辅助诊断炎症相关性疾病［2］。木研究拟对拟诊AA患者进行血清mtDNA及常规WBC和血清CR

4、P检测，以评估血清mtDNA在AA诊断中的价值。1.资料及方法1.1临床资料本研宄纳入2013年9月〜2015年9月拟诊为AA的入院患者164例，其中男性87例，女性77例；年龄12〜70(42.4±30.8)岁。拟诊AA的患者均接受阑尾切除术。根据术中病理结果分组，分别分为B组(非阑尾炎组42例)，包括急性右侧附件炎21例，右侧卵巢黄体破裂出血11例，右侧输尿管结石8例，麦克尔憩室2例；C组(急性单纯性阑尾炎69例)；D组(急性化脓性阑尾炎53例)。同时纳入同期体检的健康人38例(A组)，男20例，女18例，年龄13〜68(39.7&plu

5、smn;28.9)岁，健康人均排除肝胆、血液系统及免疫系统疾病。1.2观察指标及方法A组健康人于清晨空腹采集外周静脉血；B、C和D组患者与入院当吋采集外周静脉血，即吋送我院检验科行血常规检测得到WBC数值和检测CRP;同吋将采集的血液标本通过1000g/min离心后取上清，即得到血清，-80°C保存，一月内通过实时荧光PCR检测mtDNA水平。mtDNA检测方法[3]:血清中mtDNA浓度测定使用基于SYBR-Green染色的焚光定量PCR技术分析。人类mtDNA(humanNADHdehydrogenase1gene)引物上游为：CGAGCAGTAGCC

6、CAAACAAT；下游为：TGTGATAAGGGTGGAGAGGTK荧光定量PCR检测mtDNA浓度步骤为：初始阶段2分钟，50°C；第一步变性温度为95°C,3分钟；紧接着是95°C1O秒钟、55°C15秒钟和72°C10秒钟的循环，共39个循环。标准曲线为携带有人类mtDNA的质粒(SC101172，ORIGENE,USA)十倍梯度稀释获得。mtDNA浓度使用标准的转换系统转换成拷W数(http://cels.uri.edu/gsc/cndna.htmDo血清mtDNA浓度的计算公式为：c=Q×VDNA/VPCR×l/VEXT其

7、中c代表血清中mtDNA的浓度;Q代表荧光定量PCR检测的样本中mtDNA的拷贝数;VDNA代表每个血清样本中提取DNA的总体积，本实验中为200μl;VPCR代表荧光定量PCR吋加入DNA的体积，本实验中为lμl；VEXT代表提取DNA吋使用的血清的量，本实验中为50μl。1.3统计分析所有计量资料数据均以均数±标准差（Mean±SD）表示，各组数据比较前行方差齐性检验，如方差齐则进一步行方差分析或t检验，如方差不齐则行变量变换再行方差分析或t检验。采用EpiData3.0软件录入数据，SPSS16.0软件（

8、SPSS16.0;SPSSInc.,Chicago,IL,USA）