现代生物医学技术前沿

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1、生物分子间相互作用分析系统（BIAcore）1.BiomolecularInteractionAnalysiscore生物分子相互作用分析系统BIA技术是基于表面等离子共振（SPR）的物理光学现象的新型生物传感分析技术。不必使用荧光标记和同位素标记，从而保持了生物分子的天然活性2.工作原理：实验时先将一种生物分子固定在传感器芯片表面，将与之相互作用的分子溶于溶液屮，流过芯片表面。检测器能跟踪检测溶液中的分子与芯片表而的分子结合、解离整个过程的变化。传感器芯片：传感器芯片是实吋信号传导的载体芯片，是在玻璃片上覆盖了一层金膜，在金膜的表面连有不同的多

2、聚物用于固定不同性质的生物分子。每个芯片表面冇4个通道（FC），可以独立做4个不同的实验，为了满足分析各种生物体系的要求，专门设计了多种传感器芯片。每一种芯片都具宥良好的品质能提供：稳定的基线，高灵敏度，广泛的再生方法，反复使用性和特别好的重现性。液体传送系统：微液流盘是一个液体传送系统，通过软件的控制自动地传送一定体积的样品至传感器芯片表面。通过对管道内微型气阀的控制，形成各种液体流动回路，将样品或缓冲液送到传感片表面的不同通道。甚至自动进行样品的回收。SPR光学原理：当入射光以临界角入射到两种不同介质的界面吋将产生全反射，由于在介质表面镀上一

3、层金属薄膜后，入射光nJ•引起金属中自由电子的井振，（从而导致反射光角度减弱，使反射光完全消失的角度称作共振角）。共振角会随金属薄膜表而通过的液相的折射率的改变而改变，折射率的变化（RU）与金属表面的生物大分子质量成正比3.应用：测定分子复合物的生成和解离的速度共聚焦激光显微镜的原理与应用理论：共聚焦激光扫描荧光显微镜:是以激光作为光源、采用逐点扫描及共轭聚焦技术，能对样本进行断层扫描，以获得高分辨率焦平面光学图像的荧光显微镜系统.基本原理：高压汞灯（滤镜分光），紫外、蓝、绿（激发），被荧光探针染色的生物样本（光学成像），被标记结构的荧光图像。1

4、、由于采用了逐点扫描及共轭聚焦技术，激光扫描共聚焦荧光显微镜采集的样本焦平面荧光图像远比普通荧光显微镜获得的祥本全层图像分辨率高2、巾于激光的穿透性强，共聚焦荧光®微镜可对样本进行连续断层扫描而获得序列光学切片，可实现样本结构的三维重建3、由于激光的单色性好，对于多重标记的样本，激光扫描共聚焦荧光显微镜区分不同颜色标记物的能力较普通荧光显微镜强4、由于激光扫描共聚焦荧光显微镜可对厚样本进行光学切片，可用振荡切片机直接对新鲜或固定样木切厚片（50〜100m）,避免了石蜡包埋、冰冻等传统切片方法对细胞结构和抗原性的破坏，并可实现活组织检测。实验：固定

5、的目的是使构成组织细胞成分的蛋0等物质不熔于水和有机溶剂，并迅速使组织细胞中各种酶降解、失活，防止组织自溶和抗原弥散，保持组织细胞的完整性和所耍检测物质的抗原性。固定方法：侵入法，灌注法切片方法：冰冻切片，石蜡切片，振动切片流式细胞仪的工作原理与应用理论：(10分问答题)流式细胞术原理：FCM是利用流式细胞仪(FlowCytometer)分析在商压商速下通过样品孔径的单个细胞，在激光束的照射下的发出的散射光和与细胞表面结合的荧光标记的单抗的荧光信号。检测信号：(1)散射光信号FS:前句角散射光，反映细胞的大小和尺寸；SS:侧向角散射光(90度散射

6、光)，反映细胞内颗粒物质的大小和多少；(2)荧光信号1.细胞生物学中的应用：(1)细胞周期分析：在细胞周期内，DNA含量随时相发生周期性的变化.通过荧光探针对细胞进行相对DNA含量测定，可分析细胞周期冬吋相的百分比，周期动力学参数以及DNA异倍体.利用特殊的荧光染料(PI、EB、AO等)与细胞内DNA碱基结合，被荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光，荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量(2)细胞内钙离子浓度测定:焚光染料(如Quin-2，Indo-l，Fura-2，Fluo-3和Rhod-2等)通

7、过乙酰甲脂(AE)导入细胞后，与钙离子特异性结合.故测荧光强度可得到钙离子浓度的相对值2.免疫学中的应用：(1)各种免疫细胞的表面标志，细胞分选等；利用不同细胞表面的人类白细胞分化抗原(CD)分子或CD分子组合的不同，可以再不同样木中检测到特定细胞群所占的百分比，可明确疾病状态，或经特殊抗原刺激后产生记忆细胞的比例(2)细胞内各种细胞因子的检测来观察细胞免疫状态(3)HLA群体分型；3.细胞凋亡研究中的应用：(1)用PI，AO，HO和RM23等染料染色，可将坏死细胞，凋亡细胞和活细胞定量地区分开来(2)分析细胞周期和凋亡：实验：阳性对照：使川己知

8、阳性样本，帮助排除试剂的质tt、浓度、特异性以及染色方法等因素造成的假明性结果同型对照：将空白对照样木用同型对照抗体标记，用于排除非特异