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1、大孔吸附树脂分离纯化长春花中长春碱和长春新碱【关键词】大孔吸附树脂；长春花；长春新碱；长春碱Abstract：ObjectiveTooptimizethetechnologicalparametersofseparationandpurificationofvinblastineandvincristinefromGatharanthusRoseus.MethodsDifferenttypesofmacroporousadsorptionresinGatharanthusRoseus,elutingnchromatography,theproc
2、essonitoredbyHPLC.ResultsAB-8typeresinshog/g.Throughsilicagelcolumnchromatography,thepurityofvincristinepleandreasonableacroporousadsorptionresin；GatharanthusRoseus；vinblastine；vincristine长春花为夹竹桃科长春花属中一种重要的药用植物,迄今已经分离出70余种生物碱,其中以长春新碱(Vincristine)和长春碱(Vinblastine)最具价值。长春新碱通过作
3、用于肿瘤细胞微管蛋白而干扰肿瘤细胞代谢,临床主要用于治疗急性淋巴细胞白血病、何杰金及非何杰金淋巴瘤,也用于乳腺癌、支气管肺癌、软组织肉瘤及神经母细胞瘤等。对于长春碱和长春新碱的分离纯化工艺,国内外已有相关介绍,GunaselceraSarathP[1]、Atta-ur-Rahman[2]、Jean-HuguesRenault[3]等人分别采用不同方法纯化长春碱和长春新碱,但大都烦琐、耗时、耗费有机溶剂,造成环境污染,且成本高,不利于工业化生产。 由于大孔吸附树脂广泛应用于天然植物活性成分(皂苷、黄酮、生物碱等)的提取分离[4-6],经该技术处
4、理后可使有效成分高度富集,且可有效除去大量糖类、无机盐等成分,降低产品吸潮性,提高产品质量。因此,本试验主要通过此技术对长春花中长春新碱和长春碱的分离纯化工艺进行研究,并配合硅胶柱层析,得到较高纯度的长春碱和长春新碱。 1仪器与试药长春花提取液(自制,含总碱17.95mg/mL,沈阳药科大学生物化工实验室鉴定)；长春花(海南省)；长春新碱和长春碱标准品(广东岭南制药有限公司提供)。甲醇(山东市禹王实业有限公司化工分公司),磷酸(沈阳经济技术开发区试剂厂),二乙胺(天津市博迪化工有限公司),乙醇(天津市百世化工有限公司),超纯水(杭州娃哈哈集团
5、有限公司),硅胶(青岛海洋化工厂分厂)。大孔树脂：D101(天津市瑞金特化学品有限公司),D102(天津南开大学化工厂),AB-8(天津南开大学化工厂),D-3520(天津南开大学化工厂),HPD-100(河北沧州宝恩化工有限公司)。JY92-2D型超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司),高效液相色谱仪(日本日立公司),DF-101S型恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限公司),SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限公司),ALC-210.3型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),800B台式离心机(上海安亭科学仪
6、器厂)。 2方法与结果 2.1高效液相色谱分析色谱条件：采用Diamonsi1TMC18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm,迪马公司)；流动相为甲醇-水-二乙胺(700∶295∶5),磷酸调pH＝7；柱温为30℃；流速为1.0mL/min；紫外检测波长为297nm；进样量为20μL。 长春新碱标准曲线方程为：A＝3×107C－12292(r＝0.9995),线性范围2.0～20.0μg/mL；长春碱标准曲线方程为：A＝2×107C－78105(r＝0.9996),线性范围5.0～30.0μg/mL。 2.2长春碱和长春新碱分离纯化工
7、艺的优选 2.2.1长春花提取液的制备 以长春花全草为原料,提取长春总碱主要采用超声法,最佳工艺为：90%甲醇水溶液作溶剂、浸泡时间为16h、超声温度为40℃、功率为600in。长春新碱和长春碱的提取率可达到90.14%和79.26%。 由于药液浓度直接影响树脂的吸附效果,根据Langmuir单分子层理论[7],树脂的吸附量与药液的浓度在一定范围内成正比,因此,根据预试验,选择最佳药液浓度为17.95mg/mL,其中长春新碱8.11mg/mL,长春碱6.12mg/mL。 2.2.2树脂的筛选 选择大孔吸附树脂分离有效成分时利用其吸附的
8、可逆性[8-10]。根据“相似相溶”原理,脂溶性成分如生物碱等应选用非极性或弱极性树脂,因此,预选D101、D102、AB-8、D-3520、HPD-
