adscs在脂肪移植中的应用与研究

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1、ADSCs在脂肪移植中的应用与研宄暴志国张建文（通讯作者）王琪影张歌王琰（解放军第153医院激光整形美容中心450007）【摘要】目的：探讨ADSCs在脂肪移植当中的应用与研究。方法•：1利用消化法提取ADSCs（ADSCs）在DMEM完全培养液基中培养、传代,收集第3代细胞作为种子细胞。2细胞+生物支架复合物取材、制备和植入。脂肪颗粒做为支架材料和种子细胞混合制成细胞-生物支架复合物，实验分3组:组①ADSCs按25×106个/ml浓度与脂肪颗粒1:1混合;组②单纯脂肪颗粒;组③单纯ADSCs配制成浓度12.5×106个/ml浓度。按每一样木0.2ml注

2、射到裸鼠（12只,6w雄性）背部皮下，形成3个点,每组各1个点,3个月后分别取材分析。结果：三组均可见有新生组织形成，Masson三色染色染色法中三组中均可见脂肪细胞及胶原蛋白。三组中体积组①>组②>组③，质量组①>组②>组③，P值<0.05。RT-PCR示三组中均见到人类mRNA表达。Westernblot示三组中均可见I型胶原蛋白表达。结论：ADSCs可促进局部血管形成，减少游离移植脂肪的吸收，促进局部胶原蛋白形成，在局部微环境的诱导下向脂肪细胞分化的趋势。【关键词】ADSCs组织工程技术脂肪移植胶原蛋白含量【中图分类号】R62【文献标识码】A【

3、文章编号】1672-5085（2014）17-0104-02脂肪移植已有100多年历史，自体脂肪移植以其无排异反应，无免疫原性，可在体内长期存活等无可替代的优点备受广大求美者和医生的青睐。被广泛应用于修复体表软组织缺损。随着脂肪移植应用范围扩大其不足之处逐渐显现出来，高吸收率，可达60%〜70%,移植中心部位会岀现坏死纤维化、液化、钙化等现象，使脂肪移植受到一定的限制。如何减少移植脂肪细胞的液化吸收，增加成活率成了很多整形医生的研究课题。2001年,Zuk4等从游离脂肪组织中成功分离培养出具有向骨、软骨、脂肪、肌肉等多向分化潜能的细胞，人们对ADSCs有进一步的认识并迅速应用到组

4、织工程种子细胞研宄领域。ADSCs的多向分化潜能也被许多研宄所证实。但是，S前对ADSCs在体内环境下的安全性、可控性尚无定论，有待进一步研究，本实验应用组织工程技术,选择脂肪颗粒为支架材料，以ADSCs为种子细胞构建种子细胞+支架复合物，移植在裸鼠体内，观察种子细胞+支架复合物在宿主体内的生长情况。1材料与方法1.1试剂II型胶原酶（美国gibco）、DMEM培养液（美国gibco）、胎牛血清（美国HyClone）、PBS液、胰蛋白酶（北京Solarbio）、碱性成纤维细胞生长因子（北京双鹭药业）。1.2主要器材超声组织匀浆机、纯水系统、恒温C02培养箱、低温台式离心机、精密天

5、平、恒温摇床、倒置相差显微镜、超净工作台、培养瓶、离心管、脂肪抽吸针等。1.3实验动物：BALB/cNude裸鼠，12只5w龄，雄性，奋北京维通利华实验动物技术有限公司提供，在河南省动物实验中心饲养。1.4细胞培养脂肪组织来源于吸脂塑型的求美者。抽取部位为双下肢股外侧及股后侧脂肪。以消化法提取ADSCs,取第3代细胞作为实验种子细胞。将ADSCs配置成25×106个/ml浓度备用。1.6干细胞表面标志物鉴定：ADSCs是一组来源于脂肪组织的混合干细胞群，流式细胞仪测定细胞表面抗原简单，易于操作，灵敏可靠。1.7ADSCs移植抽取股外侧脂肪，去红细胞，脂肪颗粒与ADSC

6、s混合制成细胞-生物支架复合物。实验分3组爼①ADSCs按25×106个/ml浓度与脂肪颗粒等体积混合；组②单纯脂肪颗粒;组③单纯ADSCs。按每一样本0.2ml注射到裸鼠（12只,6w雄性）背部皮下，3个月后取材检测分析。1.8Masson三色染色法Masson三色染色法印染标本组织，明确组织成分。读片：胶原蛋白呈蓝色，脂肪呈空泡状，肌肉组织呈红色，细胞核呈紫红色。1.9通过RT-PCR测定新生组织染色体ZFXmRAN收集标本，提取RNA，纯化。采用GelDoc2000凝胶图像分析仪采集图片，QuantityOne分析软件对条带进行分析，基因编码区的引物序列由，奋上

7、海捷瑞生物工程有限公司设计合成。上游引物ZFXsense5’-AAGGTTCCCCTGGACGAGAC-3’下游引物ZFXantisense,5’-GCCACGGTGACCCTTTATGC-3’1.10I型胶原蛋闩表达测定收集所形成标本，提取蛋白质，分析测定新生组织物中I型胶原蛋白表达。1.11统计分析：数据导入SPSS17.0统计包，应用卡方单因素检验，及LDS行组间差异分析。2结果2.1ADSCS的培养及鉴定ADSCs在DMEM