实验五激活剂

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1、实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对嗨性质的汄识，了解测定ct-淀粉嗨活力的方法。二、实验原理酚是生物体rt只有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。嗨催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子杏关等特点。能提岛酶活力的物质，称为激活剂。激活剂对酶的作用冇一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制成丧失的物质称为酶抑制剂

2、。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为.K抑制剂。应注意的足激活剂和抑制剂不足绝对的，科些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。酶促反应屮，反应速度达到最人值吋的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方而随看温度的增加，反应速度也增加，直至最人反应速度为止；另一方而随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。同样，反应屮某一PH范围內酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然卜'降，

3、其变化趋势呈钟形曲线变化。食品级（X-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆尚、黑曲霉、米曲蒋等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。（X-淀粉酚屈水解酶，作为生物催化剂川’随机作用于直链淀粉分了内部的a-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分了切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称（X-淀粉酶为液化淀粉酿。a-淀粉酶不能水解淀粉支链的a-l，6糖

4、苷键，W此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和（x-l，6键的寡糖。木实验通过淀粉遇碘敁蓝色，糊精按W分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来迫踪a-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响（一）试剂及树料1、1:30喃液淀粉酶配覚用蒸馏水漱U,lmin后收集唾液，以1:30倍蒸馏水稀释。2、0.2%可溶性淀粉3、l%NaCl溶液4、1%CuSO4溶液5、标准稀碘液吸取（二）仪器设备电热怛温水

5、浴锅。（三）操作方法取试管3根，编弓•后按下表配置实验样液。试管序号0.2%可溶性淀粉l%NaCl1%CuS04蒸馏水混匀，放入37°C水浴屮1：30唾液淀粉酶不显蓝色所需时问12.0mL1.0mL//保温10min。1.0mL2’30min22.0mL/1.0mL/立即加入唾1.0mL超过15min32.0mL//1.0mL液淀粉酶。1.0mL4,39min川点滴管并不断从试管中吸取样液于比色白瓷板，用稀碘液检验试管内淀粉被淀粉嗨水解的程度，记录各试管内样液遇碘不显蓝色的先后顺序，解释实验现象的原因。

6、四、溫度与PH值对液化淀粉酶活力的影响（一）试剂与材料1、2%可溶性淀粉溶液称取可溶性淀粉2.0g（预先在105°C烘丁0,预加20mL蒸馏水调匀，然后倾入80mL沸水屮煮沸至济液透明，冷却后定容至lOOmL。2、PH4.0、5.0、6.0、7.0、8.0磷酸氢二钠-拧'檬酸缓冲溶液（1）0.2mol/mLNa2HPO4称取35.60gNa2HPO4.2H2O,用水溶解定容至lOOmL。（2）使用酸度计，用柠檬酸调整至所需的PHffi。3、供试酶液的制济称取同体a-液化淀粉酶l.OOg,加入PH6.0磷

7、酸氢二钠-佇檬酸缓冲溶液100mL（缓冲液的加入景视酶活力大小而定，控制酶解反应在5-10inin内完成），于40°C恒温水浴中活化0.5小时，然后川3000rpm/min离心机离心分离5min，嗨提取液于冰箱保存，供试验用。4、标准比色液甲液：称取氣化钴（COCI.6H2O）40.2439g、干燥重铬酸钾0.4748g,溶解并定容至500mL。乙液：称取铬黑T40.00mg，溶解并定容至100mL。使用时取甲液40.0mL、乙液5.0mL，混合。混合比色液宜放置冰箱保存，使用7天后®新配置。5、标准稀

8、碘液。（二）仪器设备电热怛温水浴锅。（三）操作方法1、用滴管吸収一定量标准比色液T白色瓷比色板空穴屮，作为判断酶解反应终点的标准色。2、不同湿度对a-液化淀粉嗨活力的影响取4根^25x20001111试管，按卜*表配制反应溶液。试管序号12342%可溶性淀粉20.0mL20.0mL20.0mL20.0mLPH6.0缓冲液5.0mL5.0mL5.0mL5.0mL把四根试管分别放入50°C、60°C、70°C、80°C恒温水浴屮预热lOmin分