实验3细胞固定剂及透膜剂对细胞膜透性的影响

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1、实验3细胞固定剂及透膜剂对细胞膜透性的影响姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1.通过观察红细胞在不冋液体中的表现，加深对细胞膜选择通透理论的理解2.探索细胞固定剂及透膜剂对细胞膜通透性的影响二、实验原理1.红细胞膜为选择性通透性膜，容许某些分了•进出细胞，若进入细胞的液体多于出细胞的液体，就会造成红细胞胀人；当细胞体积增加超过67%时，红细胞脱破裂、溶血(胀破，血红蛋D释放到介质中)；而当出细胞的液体多于进入细胞的液体时，红细胞出现皱缩现象。2.细胞透脱剂TritonX-100可破坏细胞脱脂质双层而引起正常细胞破坏。3.化

2、学固定剂能够使细胞A大分了交联或沉淀，继而由流动状态变为固定状态。4.固®前后的细胞在低渗液及透膜剂屮的变化不M，可通过溶血实验及选择性透膜染料染色加以显示。5.细胞膜对不M物质的通透性(1)带电离子不能K接通过脂双层膜(2)小的极性分子，如水、尿素、C02等，能穿过脂类分子的极性头部区而得以穿过脂双层，穿膜速度取决于油/水分配系数及溶质(水)产生的渗透压。(3)不带电荷的冇机小分了，如一些小分子醇类，可以通过简单扩散(靠浓度差)直接穿过脂质双层进出细胞。拙胞股的结钩三、实验材料、试剂及器材1.材料：绵羊抗凝全血2.试剂(1)0.01m

3、ol/L(pH7.2)PBS(2)10%中性福尔马林固定液(3)0.4%台盼蓝生理盐水染液(4)蒸馏水(5)0.5mol/L氯化钠(6)0.2%TritonX-100生理盐水3.器材(1)lOmL低速离心机、普通光学显微镜(1)10mL刻度试管、试管架、胶头吸管、载玻几及盖玻扑等四、实验操作1.制备50%绵羊血细胞悬液。血细胞样品的准备：取1支10mL的刻度离心管，加入5mL血液，1000r/min离心8min，弃上淸；再向细胞沉淀加5mL0.9%屯现盐水重忌细胞，1000r/min离心8min,弃上清；视细胞沉從体职，加等体税生理盐水

4、重总细胞，使成50%的细胞悬液。2.细胞固定。(1)取1支10mL刻度离心管，向1支加入0.5mL50%绵羊血细胞悬液(2)1000r/min离心5min弃上清;(3)加入2mL10%中性福尔马林固定液，固定20min;(4)1000r/min茵心5min弃上清；(5)川鉍化钠生理盐水恢复至原來体积。3.同定前后红细胞变化的检测(1)固定前红细胞在不同渗透性溶液及TritonX-100中的变化检测1.5mL0.15mo1/L鉍化钠溶液+1滴血1.5mL0.5mol/L氯化钠溶液+1滴血1.5mL蒸馈水+1滴血1.5mL0.2%Trito

5、nX-100的生理盐水溶液1滴血(2)固定后红细胞在低渗液及Trit.onX-100中的变化检测1.5mL蒸馏水+1滴血1.5mLTritonX-100溶液+1滴血。4.检测不同醇溶液对细胞的影响。五、实验现象及结论1.固定前红细胞在不同渗透性溶液及TritonX-100屮的变化检测序号(1溶液类型)0.15mol/L氯化钠溶液(2)0.5mol/L氯化钠溶液实验现象试管中血液浑浊，无溶血现象发生，妞微镜下细胞形态未发斗:变化，仍是双面凹的圆饼状实验现象试管屮血液浑浊，无溶血现象发牛.，显微镜下有一些细胞发生皱缩。蒸馏水(4)0.2%T

6、ritonX-100的生理盐水溶液同上加入血液后立刻溶血(Is之内)，试管由浑浊变得澄淸透明，显微镜下看不到完整的细胞。加入血液后立刻溶血(Is之内)，试管由浑浊变得澄清透明，制作装R时，滴到载坡片上的混合液会迅速扩散至整个玻片，显微镜卜费不到完整的细胞。(1)红细胞悬液无溶血现象，红细胞形态不发生变。原因是0.15mol/L的氯化钠溶液与红细胞等渗。(2)红细胞悬液无溶血现象，红细胞边缘出现毛刺，说明红细胞脱发生了皱缩。原因足0.5mol/L的氯化钠溶液的渗透压高于红细胞的渗透压，红细胞失水皱缩。(3)红细胞悬液川现溶血现象，视野中无

7、完整的红细胞，只有一些破碎的细胞膜。原W是蒸馏水的渗透压低于红细胞的渗透灰，红细胞吸水胀破。(4)红细胞悬液出现溶血现象，视野屮无完整的红细胞，只奋一些破碎的细胞膜。原W是细胞透膜剂TritonX-100讨破坏细胞膜脂质双层时引起正常细胞破坏，大S溶液进入红细胞内使其破碎。2.固定沿红细胞在低渗液及TritonX-100中的变化检测序号溶液类型实验现象(1)蒸馏水起初不发生溶血现象，试管内血液浑浊，放®6分30秒后，试管内血液变得完全澄清透明。(2)0.2%TritonX-100的生理盐水溶液起初不发生溶血现象，试管内血液浑浊，放置4分

8、钟后，试管内血液变得完全澄清透明。(1)红细胞悬液最终发生溶血现象，红细胞破裂。原因是尚定剂使细胞的蛋白质凝同，防止细胞(M溶或异溶，以保持原冇结构和形态，所以更难发生溶血现象。(2)蒸馏水所用时间比Tri