秋水仙素处理对兰花原球茎生长、分化和诱变效应的研究

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1、秋水仙素处理对兰花原球茎生长、分化和诱变效应的研究本作品获第七届“挑战杯”全国人学虫课外学术科技作品兗赛成功参赛奖萧爱兴梁彩红蔡泳消指异老师：张志胜摘要：研究了秋水仙素处理对兰花原球茎生长、分化和诱变的效应。结果表明，秋水仙素处理对原球茎生长和分化起抑制作用。浓度越高，抑制作用越强。处理时间不同，抑制作用也不同。秋水仙素处理后的再生植株群体中，变异植株的百分率平均为9.06%,是对照材料的3.7倍。变异植株的类型包括植株粗壮，多叶，叶片变宽、变厚，叶片墨绿色，矮化，线艺和叶艺等。处理浓度为0.10%，时间为48h时，植株变异率最高。关键词：兰花；原球茎；多倍体；秋水仙

2、素；分化刖目兰花叶姿优美、花吐幽香，素有“花屮君子”之称，既可作盆花观赏亦可作切花使用，具有重要的观赏价值和经济价值。多倍体育种是兰花育种重耍的方法之一（张志胜，2000）。Winber（1963）用秋水仙素对蕙兰属的原球茎进行处理，结果发现40%原球茎的染色体加倍；Hsien等（1992）用125mg/L秋水仙素处理DortispuJcherrima的股球茎，当脸球莖直径为11.2mm时，原球茎博生率为42-59%，再生植株中46%为叫倍体；Kim等（1997）用0.05%秋水仙素处理寒兰根状茎，在再牛.植株中，52.2%是叫倍体；林芬等（1997）以春兰原球茎为材

3、料，用紫外线和秋水仙素进行人工诱变处理，经秋水仙素处理的原球茎分化的植株中出现了植株变矮、叶片增宽、增厚的变异类型；吴汉珠等（1999）用秋水仙素对朱砂兰和红蝉兰的杂种植株进行处理，培育出兰花多倍体富丽红。木文以墨兰X人花蕙兰的球茎为材料，系统地研究秋水仙素处理对兰花原球茎生长、分化和诱变效应，以期建立兰花多倍体诱导方法，获得兰花异源多倍体。1材料和方法1.1材料培养墨兰（小香）X大花蕙兰杂种h种子，诱导•出原球茎，继代繁殖儿代后，以稳定正常生长的原球茎为材料。秋水仙素为Sigma公司产品。1.2方法1.2.1秋水仙素处理在液体培养基屮加入不同分量的秋水仙素，将在继代

4、培养基屮生长2周的原球茎浸入其屮，进行不M时间悬浮培养（如表1）,条件：PH5.4,溫度25°C,摇床转速90rpm。液体培养基成分：MS+6-BA1.Omg/L+NAA0.lmg/L+糖30g/L+椰子汁5%。表1各处理的秋水仙素浓度和处理时间处理秋水仙素（％）处理吋间（h）A10.1036A20.1048A30.1060B10.2524B20.2536B30.2560C0.4024CK0241.2.2处理材料的培养和观察把处理后的原球茎接到继代培养基（MS+6-BA0.lmg/L+NAA1.Omg/L+糖30g/L+椰子汁5%+活性碳lg/L+卡拉粉7g/L,pH

5、5.8）上，每瓶接入10个左心，并称其重量，以M步生长材料作对照，所有材料均在同一条件下培养。培养条件是室温26土1°C，每天光照12h。30天后称秉。培养过程中观察原球茎的生长怡况，以绝对生长速度、增殖率、死亡率、褐变率表示秋水仙素的处理效应。将继代P的原球茎继续转接到继代培养基屮，每隔约10天观察记录一次，约30天转接一次，以观察秋水仙素处理的后效应。分化出的苗接到生根培养基（1/2MS+6-BA0.25mg/L+NAA2.Omg/L+糖20g/L+活性碳1g/L+卡拉粉7g/L，pH5.8）上，光照24h，室温26±1°C,观察其变兄惜况。绝对生长速度、增殖率、

6、死亡率、褐变率的计算方法如卜：绝对生长速度（％）=（培养后总秉M—接种秉鲎）+接种秉MX100增殖率（％）=（培养活的总茎数一接种的茎数）+接种的茎数X100死亡率（％）=（死亡个数+接种总数）X100褐变率（％）=（褐变个数+接种总数）X1002结果与分析2.1秋水仙素浓度对原球茎生长的影响将处理后的原球茎接到继代培基屮，培养30天后，称鲜重，计算其绝对生长速度、增殖率、死亡率、产芽率，结果如图1。ooooOooooO54321M^HA12B图1秋水仙素处理对原球茎生长和分化的影响*A1和B2处理时间均为36h，A3和B3处理时间均为60h,B1和C处理时间均为24

7、h由阁1可见，对照原球茎的增殖率为413.9%，绝对生长速度为220.33%，产芽率为38.6%（-其中13.9%己分化出根）；而秋水仙素处理P原球茎的增殖率、产芽率和绝对生长速度均明显小于对照,其死亡率高于对照。这表明秋水仙素对原球茎生长和增殖有抑制作用。处理时间相吋，秋水仙素浓度商，绝对中长速度越低，死亡率越商，表明秋水仙素浓度越尚，抑制作川越人。2.2处理时间对原球茎生长的影响研究了处理时间对原球茎生长的影响，结果如阁2。由阁2可见，秋水仙素浓度为0.10%时，处理时间越短，其死亡率越高，增殖率和绝对生长速度低。当秋水仙素浓度为0.25%时，处