全氟辛烷磺酸对大鼠兴奋性氨基酸影响

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1、全氟辛烷磺酸对大鼠兴奋性氨基酸影响【目的探索全氟辛烷磺酸（PFOS）和大鼠中枢神经系统兴奋性氨基酸的时间反应关系。方法将成年g/（kg·bol/（g·protein），和对照组（1.30±0.063）μmol/（g·protein）比较，差异有统计学意义(P＜0.05）。天冬氨酸无明显变化。甘氨酸8,24h含量分别为（1.24±0.352），（1.09±0.215）μmol/（g·protein），和对照组（1.54±0.120）μmol/（g·protein）比较，差异有统计学意义(P%26lt;0.05）。γ-氨基丁酸含量24h为（1.68±0.188）μmol

2、/（g·protein），和对照组（2.03±0.370）μmol/（g·protein）比较，差异有统计学意义(P%26lt;0.05）。结论低剂量PFOS染毒后中枢神经系统出现先抑制后兴奋的症状可能和兴奋性氨基酸的参和有关。【全氟辛烷磺酸　　全氟辛烷磺酸（Perfluorooctanesulfonate，PFOS）是近年来引起环境学者密切关注的新发现的持久性环境有机污染物，具有难溶性、生物蓄积性和沿食品链向高位营养级的生物体内富集的功能〔1〕。探究表明,PFOS可引起恒河猴体重减轻、血液多种生理生化指标异常、肝细胞空泡化等改变〔2〕。PFOS的污染已遍及全球生态

3、系统〔3〕。本实验旨在对低剂量PFOS暴露条件下，大鼠脑组织中的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸含量的时间变化进行测定，探索PFOS神经毒性功能机制。　　1对象和方法　　1?1试剂和仪器全氟辛磺酸钾盐（瑞士fluka公司），用2%吐温-80配制。邻苯二甲醛、氨基酸标准品谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸（美国Sigma公司）。醋酸钾为分析纯，甲醇为色谱纯。高效液相色谱仪为HPHEm×4.6mm5μm）（美国Phenomenex公司）。超声波细胞粉碎机JY96-ⅡN（宁波新芝生物科技股份有限公司）。　　1?2实验动物分组及处理健康成年g/(kg·bin，在冰

4、水浴条件下超声脑组织，3500r/min，4℃离心20min，取上清100μl用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。另取上清1ml10000r/min，4℃高速离心20min后，取其上清，以备氨基酸测定。　　1?4考马斯亮蓝法测定脑组织蛋白质含量称取10mg小牛血清蛋白，溶于蒸馏水中，分别稀释配制成0.2，0.4，0.6，0.8，1mg/L的标准品。分别取100μl待测样品加进考马斯亮蓝5ml，722分光光度计比色，测定待测样品中的蛋白质含量以备标定氨基酸。　　1.5邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱荧光法检测氨基酸含量标准液配制：分别用1mol/L氢氧化钠溶液配制谷氨

5、酸、天冬氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸标准品1mmol/L的储备液，临时用1mol/L氢氧化钠稀释配制成0.01，0.05，0.1，0.5，1，5，10，100μmol/L的标准系列。衍生试剂配制：称取20mg邻苯二甲醛，0.5mlβ-巯基乙醇溶于0.5ml甲醇中；再加进9ml0.4mol/L硼酸缓冲液(pH为10.5);超声溶解，新鲜配制，避光保存。衍生化反应：在室温下，吸取氨基酸标准液或样品液100μl，1mol/L氢氧化钠溶液100μl，加进邻苯二甲醛衍生试剂400μl，混匀静置2min后，进样30μl。　　1?6色谱条件色谱柱：C18色谱柱（150mm×4.6m

6、m5μm），柱温为28℃。活动相A：0.1mol/L醋酸钾溶液，pH=5.89。活动相B：HPLC级甲醇。B相梯度洗脱条件：0～10min10%→25%；12～19min47%→60%；22～27min100%→100%，28min10%，平衡5min，30min结束洗脱。用安捷伦色谱工作站记录并分析结果，峰面积用外标法定量。荧光检测器，激发波长250nm，发射波长410nm。　　1?7统计分析采用SPSS11.5软件进行方差分析。　　2结果　　2?1行为观察PFOS染毒组大鼠在染毒2h后出现活动减缓，少动呆卧，嗜睡，24h后活动恢复正常。对照组未见异常改变。　　　

7、　2?2色谱行为在上述色谱条件下，标准液及大鼠脑组织中的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸均得到良好分离。　　2.3不同PFOS急性染毒时间脑组织氨基酸含量变化比较（表1）　　表1PFOS暴露时间大鼠脑组织氨基酸含量的比较（略）　　注：和对照组比较,*P%26lt;0.05　　不同实验组的天冬氨酸含量无明显变化；谷氨酸含量在2,4,8h组和对照组比较，差异有统计学意义(P%26lt;0.05)；4h组含量降至最低后逐渐升高，24h已恢复正常。而抑制性氨基酸甘氨酸含量8,24h组和对照组比较，差异有统计学意义(P%26lt;0.05)；γ-氨基丁酸24h组和对