基因工程的步骤好有真原核基因区别

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1、基因工程的基本操作程序知识点一：1．原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因首端是RNA聚合酶识别和结合的部位并能驱动基因转录出mRNA。没有启动子，基因就不能转录。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控序列，最重要的是RNA聚合酶结合位点。非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止

2、子编码区非编码区非编码区内含子外显子启动子终止子知识点一：2．真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质内含子：不能编码蛋白质的序列与原核细胞相同非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码1．目的基因的获取2．基因表达载体的构建3．将目的基因导入受体细胞4．目的基因的检测与鉴定基因工程基

3、本操作的四个步骤目的基因的获取阅读课本第一自然段，回答以下问题：2．获取目的基因的常用方法有哪些？（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成1．什么叫目的基因？并举例说明。主要是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库：概念见课本2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库3.基因文库的目的为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切一定大小的DNA片

4、段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库4.基因文库的构建方法（1）直接分离法单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶（2）反转录法：cDNA的合成流程图解某种生物的单链mRNA思考：１．基因组文库和部分基因文库（如cDNA）的关系？2．基因组文库和cDNA文库的比较3．如何从基因文库中得到所需要的目的基因？文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子有无基因中内含子有无基因多少物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以2．利用PCR扩增目的基因（阅读课本第1

5、0页回答问题）（1）RCR的中文全称？PCR是一项什么样的技术？（2）PCR原理？利用这一技术获取目的基因的前提？（3）PCR的过程？这一过程利用了什么酶？（4）通过PCR使目的基因的数目如何增长？概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术条件：原理：方式：以_____方式扩增，即___（n为扩增循环的次数）结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制四种脱氧核苷酸热稳定DNA聚合酶指数2n在短时间内大量扩增目的基因前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列一对引物、模板DNA（含目的基因）过程：A

6、．DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________B．退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。C．延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链5/3/G—GT—C3/5/A—GC—C5/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1．变性(90－－95℃)：目的基因DNA受热变性，解链为单链；2．复性（55－－60℃）：引物与两条单链通过碱基互补配对原则结合；3．延伸（70－－75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNT

7、P为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链5/3/A—G引物Ⅰ（二)利用PC(R技术扩增目的基因PCR技术扩增与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原料条件不同点解旋方式场所酶结果四种脱氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋解旋酶催化体外复制细胞核内热稳定的DNA聚合酶细胞内的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子(二)利用PCR技术扩增目的基因目的基因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)反转录合成1．反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA