薄层色谱之薄层板的制备技术和薄层分析的点样技术训练

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1、色谱知识理论之薄层色谱理论基础、操作及薄层扫描法简介药检文摘日期:2011-8-11碑层色谱基础理论、操作及碑层扫描法简介一、基木概念及机理1基本概念：层析法（色谱法）足利用混合物屮各组分（或成分）的现化性质的差别，使各组分以不M程度分布在两个不相混溶的相中，由丁各组分的不M速度移动，因而达到分离的过程及方法。层析法分为:纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱、液相色谱法等，我们主要讨论薄层色谱法。薄层色谱法（层析法）根裾层析原理分为二大类：吸附®析：利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力不MJ，用洗脱液使组分分离，如硅胶G”氧化铝薄层层析。分配层析：利川被分离物质在两相十分配

2、系数不同使飢分分离。如微晶纤维素层析、纸层析等。2层析机理:从层析法概念屮我们了解任何层析都关系到被分离物质溶质在两相之叫的分配，即关系到分配系数（K溶质在同定相中浓度/浴质在流动中浓度的大小”只是在不同层析法中”K冇不同的意义。在吸附层析法中K称为吸附系数。KXa/Xs”表示在一定溫度卜达到平衡时”在单位时间内被吸附剂表而吸附的溶质的浓度Xa与从吸附剂表面解吸附到溶剂展开剂屮溶质浓度Xs之比。分配层析法：K为分配系数，即在一定温度下达到平衡吋，溶质在固定相中的浓度Cs与其在流动中的浓度Cm之比。即KCs/Cm二、薄层材料及薄层板的制备1材料：①背材：支持薄层吸附剂的物质耍求

3、：有一定的机械强度；能耐受展开剂和兄色剂的化学作用及腐蚀；能耐受反应的温度；表面光骨，平整，冇一定的厚度，保证吸附剂厚度均匀，以免引起误差。仪器扫描用板要求一定的板厚以便薄层斑点在仪器光束的焦距上（如Cs930”要求厚度在15mm左右。常见背材足玻璃板，一般使用的是镜而玻璃；在涂铺薄层板前，将玻璃划裁成长宽为10xl0n10xl5,,20xl0H20x20cm的玻璃板11磨边之后”用洗液或洗涤剂浸泡、洗净、晾干，表谢不应冇指纹、汕迹、水迹，否则影响吸附剂的牢固度及定性定景的准确性。②吸附剂：利用薄层层析解决一个分析任务，主要在于选择好合适吸附剂与展开剂。常用吸附剂简介：按文献

4、统计，在円常工作中硅胶G使用率在50、硅胶10、纤維素9、氣化铝3、聚酰胺25。下面对使用率高的儿个吸附剂进行讨论。硅胶：缩小硅胶"整个结构中含有许多硅醇基-Si-OH”硅胶的吸附性主要在干此基W，基上羟®与极性化合物或不饱合化合物形成氯键，产生吸附力。氧化铝由于制备方法和处理方法不同，氧化铝可分为屮性、碱性和酸性氧化铝。氧化铝的吸附力主要依靠其氧原子与被测物屮活泼氢结合成羟基而产生的。另外其暴露的A13与芳香环上ji电子作用形成a杂的络合物”也是产生吸附的因素。聚酰胺：常用柯四种，聚酰胺6、66、11、乙酰化聚酰胺、吸附力由W内部存在的酰胺键与被分离组分中的酚、酸、醌及硝基

5、化合物形成氢键而产生的。纤维素：常用有天然纤维素、微晶纤维素等。其结构是含人置P-1、4葡萄糖甙键合的纤维二糖"分子屮人量的羟基使W具亲水性，在铺板屮带入水分被纤维素吸附变成为分配薄层中的固定相。2薄S板的制备：耍求薄层板各部位的厚度均匀一致，表面平整，无划痕，少气泡，牢固性好。制板：将吸附剂涂铺在一定背材上，使成厚度均匀一致的溥层的过程。方法：分干法、湿法。一般常川湿法。湿法铺板程序：将吸附剂用一定比例的水溶液成者是含粘合剂的水溶液调匀成糊状，r;•用手工或机器将吸附剂均匀涂布薄层背材上（厚度一般在025-055mm之间置水平台上，自然阴干，吸附层析板在使用前置1O5'C活

6、化1小时后置干燥器中备用。乎工制板时使用刮板器将调匀的吸附剂通过03mm或05mm狭缝刮铺在背材上、刮铺力度耍均匀，-•般制出薄层板较佳。机器铺板的原理同手工制板，只足刮铺的速度较均匀（由机器控制）故制备的薄层板质量较稳定。另外还冇倾注铺板法、浸渍法、喷雾法等。薄层板制备中注意M题。①含煅石膏作粘合剂的吸附剂在加水或含CMC的水溶液调匀后，在2分钟内铺板"以免粘合剂固化而使铺板固难。②補板时防止板而有气泡的方法是调匀吸附剂时玻棒顺一个方M搅动，再者在调匀时滴加少许乙醇。③铺板时不吸附剂一般情况下，与溶液之比例为1:3"活化110°C30分钟。④关于活化I'Kl题，活化就是将吸

7、附剂水分加热去棹的过程，其目的就是增加吸附剂的吸附能力，增加活度。⑤关于活度问题：薄层活化是将吸附剂屮水解吸附的过程，但吸附剂与水的结合（氢键）是可逆的。判定吸附能力人小的标志足活度，活度一般分五级，测定过程足将儿种染料的配成混合液，在一定条件下展开，检查其分离度大小来判別的。在实呩工作屮一般不测定活度，但在上述规定活化的条件制备薄层板的活度一般在n—m级，注意的是活化好与薄层板应在硅胶干燥剂环境下保存备川。三、点样：1点样器简介：a层析用微景吸管10W、毛细管；以上是毛细管类，前者是厂家生产的成品，者