马铃薯s病毒pvs酶联免疫分析elisa

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1、马铃薯S病毒(PVS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂R供研究使用目的：本试剂盒用于检测马铃薯组织，细胞上清及相关液体样本中S病毒(PVS)水平。实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中马铃薯S病毒(PVS)。用纯化的马铃薯S病毒(PVS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中马铃薯S病毒(PVS)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的马铃薯S病毒(PVS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶

2、的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中马铃薯S病毒(PVS)的存在与否。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8°C保存阴性对照0.5mlXIB0.5mlXl瓶2-8°C保存阳性对照0.5mlXIB0.5mlXl瓶2-8°C保存酶标试剂3mix1瓶6mix1瓶2-8°C保存样品稀释液3mlX1瓶6mlX1瓶2-8°C

3、保存显色剂A液3mix1瓶6mix1瓶2-8°C保存显色剂B液3mlX1瓶6mlX1瓶2-8°C保存终止液3mlXl瓶6mlXl瓶2-8°C保存浓缩洗涤液(20mlX20倍)XI瓶(20mlX30倍)XI瓶2-8°C保存样本处理及要求：1.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞內的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000

4、-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2.组织标本：切割标本后，称取重S。加入一定S的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-2（rc保存，但应避免反复冻融.2.不能检测含NaN3的

5、样品，因NaN3抑制辣根过試化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50gU然后在待测样品孔先加样品稀释液40gl,然后再加待测样品10pl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用5.洗涤：小心

6、揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50Hl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50pl，再加入显色剂B50…，轻轻震荡混匀，37°C避光S色15分钟10.终止：每孔加终止液50^1,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测:W:各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值21.00;阴性对照平均值$0.

7、10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品00值＜临界值（CUTOFF）者为马铃薯S病毒（PVS）阴性阳性判定：样品OD值2临界值（CUTOFF）者为马铃薯S病毒（PVS）阳性注意事项1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境屮取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤吋不影响结果。4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5.底

8、物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°C。2.有效期：6个月FORRESEARCHUSEONLYPVSDrugNamesGenericName:PVSELISAKit.PurposeThiskitallowsforth