草莓组织培养

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1、草莓的组织培养一、茎尖 1．概述 通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基．不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。 2.结论 （1） 再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖 （2） 灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0

2、．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。 （3） 培养基：①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理. （3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。培养温度(25±2)℃ 。每

3、日光照12h，光强2 000Lux。 （1） 再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。 （2） 灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理. （3） 培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(① 为30g/ L)

4、。①用于花药诱导培养基；② 用于花药幺伤组织分化培养；③ 、④ 用  于其余5种外植体(叶盘、叶柄、下胚轴、子叶、花蕾)诱导培养；⑤仅用于花蕾培养。 （4） 条件：培养条件均为12 h光照12 h黑暗。光强度1200-1500lx、温度(25±2)℃ 。  三、叶片 以红颊、章姬、丰香草莓叶片为试材，对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究，建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明，基因型、不同激素种类和配比直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素，不同激素配比是不定芽产生的关键因素。叶片愈伤组织的诱导培养基以MS+TDZ 2

5、~3mg／1较理想，芽伸长的理想培养基为MS+6一BA 0．3～O．5mg／l，生根培养基以1／2MS+IBA0．3mg／1较适宜，移栽成活率可达90％以上。 2.结论 （1） 再生途径：先采取当年生匍匐茎茎尖培养繁殖，建立起三个品种的无性繁殖系；再从继代3周的无菌苗上剪取叶片作为外植体，进行不同的处理，每瓶接10片叶盘，每处理重复5瓶。 （2） 灭菌方法：于121℃下高温高压蒸汽灭菌20min。 （3） 培养基：基本培养基为MS培养基。茎尖培养与组培苗继代培养基为MS+6一BA0．3～0.5mg/l+蔗糖2Og/l+琼脂7g/l，pH值为5．8， （4） 条件：叶

6、片接种在诱导培养基后，直接置于温度为25℃、光照强度为20001x、光周期1 6h的培养条件下。1、取材。每年的6-8月，选择植株生长健壮，匍匐茎充实，尖端生长良好，无病虫害的优良植株取其茎尖或花药，作为组织培养的外植体。    2、 消毒。材料取来修整后用纱布包好放在自来水龙头下冲洗2-4小时（以茎尖为例），然后进行表面消毒。先用70%酒精漂洗半分钟，然后用0.1%的新洁尔灭浸泡15-20分钟，再用0.1%的升汞（氯化汞）消毒5-8分钟，最后用1-2%的过氧乙酸消毒1分钟。每次都要用无菌水冲洗3-4次后再进行下一次消毒。整个消毒过程都应在超净工作台内完成。    

7、 3、接种。接种在超净工作台内进行，接种前要先用酒精灯对接种用具（镊子、接种针、接种架等）消毒自然放凉。先用镊子一层层的剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后在解剖镜下找到生长点（可带1-2个叶原基）用接种针挑出生长点（小于0.5毫米），放入事先准备好的盛有培养基的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养成小植株。     4、 室内培养。培养室要求干净清洁，室内装有紫外线杀菌灯，每天要对室内进行消毒，以防污染。培养温度20-28℃，最适温度25℃，相对湿度70%，光照强度1000-2000勒克斯，每日光照10小时左右。      5、继代培养。每培养25-30天，培养瓶内的