藤茶止咳、化痰作用的研究

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1、藤茶止咳、化痰作用的研究藤茶俗称端午茶、藤婆茶。野生藤茶广泛分布在我省梵净山地区，其味甘甜性凉，具有清热解毒、抗菌消炎、镇咳祛痰等功效，民间常常用来治疗感冒发热等疾病的。目前为止还没有看见有和它相关的止咳、化痰药理方面的研究报道。因此笔者对藤茶进行止咳、化痰作用的动物实验研究，为藤茶的综合利用提供科学依据。1材料1.1实验动物昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，选用体重18～22g的健康动物，购自中山大学实验动物中心，合格证号:粤检证字SCXK(粤)-2009-0070。1.2样品与配制1.2.1藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取4个成分组。每组均折合生药

2、含量350mg/ml，给药剂量相当于生药3500mg/kg体重。1.2.2藤茶水提成分不同剂量组配制藤茶水提成分高剂量组为直接给药，折合生药含量350mg/ml，给药剂量相当于生药3500mg/kg体重;中剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按1∶2稀释后给药，折合生药含量117mg/ml，给药剂量相当于生药1167mg/kg体重;低剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按1∶8稀释，稀释后给药，折合生药含量38.9mg/ml，给药剂量相当于生药389mg/kg体重。1.2.3其它样品配制生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl含量0.9%;美沙芬阳性对照，含量为15mg/片，取2片溶解于20毫升生理盐水

3、中，制成悬液，其浓度为3mg/ml，剂量为30mg/kg体重;痰咳净阳性对照，剂量为200mg/kg体重;阴性对照均采用蒸馏水。2方法2.1浓氨水喷雾法研究止咳药效取昆明种小鼠120只，随机分为8组，每组15只。设阴性(蒸馏水)对照，阳性对照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分组、氯仿提取成分组、乙酸乙酯提取成分组，水提取成分组，其中水提取成分组细分为高、中、低3个剂量组。实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.3ml/20g体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后1h，小鼠接受喷雾，按一定时间喷入浓氨水气雾，结束，立即取出小鼠，观察有无咳嗽反应。观察1min内咳嗽次数，若1

4、min内出现3次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声)者，算作“有咳嗽”。否则算作“无咳嗽”。以停止接触氨水刺激后1min内咳嗽次数大于或等于3次判为阳性，个别动物在实验中出现死亡或休克，判为咳嗽阳性。用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(EDT50)。计算值，若值大于130%，说明有的止咳作用。若值大于150%，说明有显着的止咳作用(陈奇，2006;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。EDT50=log-1c/n(式中n为动物数，c为rx值的总和，r为每剂量组的动物数，x为剂量(即喷雾时间)的对数。)=给药组的EDT50/对照组的EDT50×1

5、00%2.2对小鼠气管酚红排泌量的影响标准酚红曲线的绘制:使用分析天平准确称取一定量的酚红，用5%碳酸氢钠溶解，配成每1ml含12.5μg，然后顺次进行倍比稀释成每毫升含酚红6.25μg、3.125μg、1.5625μg、0.7813μg、0.3906μg、0.1953μg、0.0977μg、0.0488μg，用分光光度计测OD值。以酚红浓度为纵坐标，OD值为横坐标，根据酚红浓度和OD值计算出回归方程。根据回归方程计算出小鼠酚红的排泄量(陈奇，2006)。取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只。设阴性(蒸馏水)对照组、阳性(痰咳净)对照药物组、藤茶水提取物低剂量组、中剂量组、高剂

6、量组。实验前小鼠禁食不禁水12h，然后各组小鼠按0.3ml/20g体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后30min，腹腔注射5%酚红生理盐水溶液0.2ml/20g，注射后30min，脱颈椎处死小鼠，剪取气管，将各气管段放入预先盛有1.5ml的5%NaHCO3溶液试管中，后置于涡流混合器上震荡2min，使气管段中的酚红完全释放，检测前试管中加入1molNaOH溶液0.1ml，离心(3000rpm，5min)，后将试管中溶液于721型分光光度计546nm处测OD值，根据回归方程计算出酚红排泌量。计算公式:y=0.119x-0.0059x为OD值，y为气管酚红排泌量(陈奇，200

7、6;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。2.3统计学处理实验数据以“均数±标准差”表示，采用SPSS12.0统计软件进行统计学处理。3结果3.1藤茶对浓氨水致咳小鼠的影响藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与阴性对照组比较，均有显着延长，在统计学上有显着差异。其中藤茶水提取物的耐受时间最长，其R值达到210.38%，阳性(美沙芬)对照组的值为225.42%，可见其疗效与阳性对照组相当，