hiv抗体检测方法2016年10月—刘经凤

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1、HIV抗体检测十堰市疾病预防控制中心刘经凤2016年10月规范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-有效版本）《艾滋病病毒抗体快速检测技术手册》（中国疾病预防控制中心，2011年版）HIV抗体检测实验室要求应符合国家对实验室生物安全的有关要求实验室的质量控制按本规范相关章节规定HIV抗体检测的目的和要点HIV抗体检测的目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。HIV抗体检测的要点1.严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。2.结果判定以试剂盒说明书为标准。HIV抗体检测的目的和要点3.筛查试验有反应，须作补充

2、试验。补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。HIV抗体检测的目的和要点4.筛查试验无反应，不应做补充试验。5.对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。常规HIV抗体检测方法试剂和样品试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。筛查方法酶

3、联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果快速检测（RT）及其它检测试验(1)明胶颗粒凝集试验(PA)(2)免疫渗滤试验(3)免疫层析试验酶联免疫吸附试验（ELISA）HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体用酶标仪测定结果有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）测定的重复性差1.加样本及试剂量不准2.加样过快

4、，孔间发生污染3.加错样本4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区5.温育时间、洗板、显色时间不一致6.酶标仪滤光片问题ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）白板（阳性对照不显色）1.漏加酶结合物2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物3.漏加显色剂A或B4.终止液当显色剂使用全部板孔都有显色1.洗板不干净2.加底物的吸头被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于仪器或加样头造成的交叉污染ELISA测定中的干扰因素内源性干扰因素外源性干扰因素内源性干扰因素人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因

5、子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等外源性干扰因素常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等酶联免疫吸附试验（ELISA）优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存用途：流行病学监测及临床大量标本的检测化学发光或免疫荧光试验采用发光或荧光底物既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物用发光仪或荧光仪测定结果全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果快速检测（RT）及

6、其它检测试验病人条质控条快速检测（RT）及其它检测试验优点:快速单份标本检测不需额外试剂或设备操作简便缺点:肉眼判断较主观价格较贵结果不易保存（建议拍照保存）HIV筛查试剂的选择检测目的实验设施条件价格其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等HIV抗体筛查结果的意义及处理阴性：真阴性未感染或暴露于HIV病毒假阴性注意窗口期阳性：真阳性感染或暴露于HIV病毒假阳性非特异性反应操作失误处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“

7、HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。HIV抗体确证试验确证试验的试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。确证样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑确证试验方法：免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。HIV确证试剂产品公司试剂原理新加坡MP亚太私人医药有限公司人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）WB杭州澳亚生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（免疫印迹法）WB上海英旻泰生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒(HIV1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹

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