分子生物学chapter 4 转录

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1、Chapter4GeneExpression基因表达（1）转录Transcription4.1基本概念转录模板模板链（-），非编码链，反义链非模板链（+），编码链，有义链模板链（-），非编码链，反义链非模板链（+），编码链，有义链转录--RNA合成5’3’5’3’5’3’模板：转录成RNA的模板；编码、有义：其信息编码蛋白质的氨基酸顺序4.1基本概念转录单位（TranscriptionUnit）从转录启动子始到终止序列为止的一段DNA序列，它控制蛋白质或功能RNA的转录。原核生物的转录单位–操纵子，多顺反子真核生物的转录单位–单个转录

2、单位，单顺反子不对称转录（AsymmetricTranscription）：对特定基因而言，转录时只使用其中一条链作为模板。不对称转录的验证：假设1：体内对称转录假设2：体内不对称转录4.1基本概念不对称转录的验证小鼠乳腺肿瘤病毒MMTV变性，分别分离两条单链（+）链和（-）链并克隆至单链DNA的M13噬菌体（+）链（-）链能杂交体内对称转录为：能杂交不对称转录的验证小鼠乳腺肿瘤病毒MMTV变性，分别分离两条单链（+）链和（-）链并克隆至单链DNA的M13噬菌体（+）链（-）链体内不对称转录为RNA不能杂交能杂交证实体内以不对称方式转录

3、模板的识别与转录起始通过转录启动子延伸终止终止信号转录过程概述4.2原核生物的转录启动子原核生物启动子RNA聚合酶转录起始和转录终止4.2.1原核生物的转录启动子启动子的发现与证实（1975年，Pribnow,D.&Schaller,H.）DNARNApolymeraseTreatedwithDNaseExtractingmaskedDNASequencingPribnowbox(-10box;-10区)ＤＮＡ足迹实验1987年，HarleyC.&ReynoldsR.:……T78T82G68A58C52A54……162117521819

4、……T82A89T52A59A49T89……1993年，LisserS.&MargalitH.,E.coliPomoter:……T69T79G61A56C54A54……161717431817……T77A76T60A61A56T82……+1TTGACA-35box-40~-30CG/ATinitiationsite上游upstream下游downstream17+1bpTATAAT-10box-10~-7原核生物的核心启动子（Corepromoter）-35区-10区转录起点Unwoundregion原核生物的扩展启动子（Extende

5、dPromoter）Extendedpromoter:Corepromoter:BindingsiteforRNApolymeraseUCE(UpstreamcontrolElement，上游控制元件;Upelement,UP,上游元件)：与CAP-cAMP结合，对基因转录进行正控制。Fissites:-170~-60,Bindingsitesfortranscription-activatorproteinFistoenhancetranscription.Suchsitesarenotclassicalpromoterelement

6、sbutactasenhancers.转录启动子变异（1）、-10区、-35区的碱基突变强弱强弱上调（上行）突变：启动子基序与标准基序没有差异或差异极小，启动转录的能力较强。下调（下行）突变：启动子基序与标准基序差异较大，启动转录的能力较弱。野生型启动子基序突变位点和类型突变方向和程度A/T→G/C：多为下行突变，增强了双链的稳定性，不易解链，导致转录效率下降。A/T→T/A：有上行突变，也有下行突变。这种突变改变了双链的碱基堆积或者与RNA聚合酶的结合能力，导致转录效率改变。-10区的碱基突变-10区和-35区碱基突变单独突变：-10

7、区或-35区突变转录效率下降100倍同时突变：-10区和-35区同时突变转录效率下降1000倍转录启动子变异（2）、-35区与-10之间的间距的突变+1TTGACA-35box-40~-30CG/ATinitiationsite17+1bpTATAAT-10box-10~-7间距长度：17±1bp间距趋近17bp→有利于RNA聚合酶的启动，上行突变；间距远离17bp→不利于RNA聚合酶的启动，下行突变。4.2.2原核生物的RNA聚合酶DNA-dependentRNApolymerase（依赖DNA的RNA聚合酶，RNAPol）RNA聚合

8、酶亚基的分离Bergess,RandTravers,A.,1969SeparatingthesubunitsofE.coliRNApolymerasebySDS-PAGE123SDS-PAGEofRNApo