适合国槐花粉保存的方法

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1、适合国槐花粉保存的方法　　0引言　　国槐（Sophorajaponica）原产于中国北方，属于豆科蝶形花亚科槐属（SophoraL.）落叶乔木，在园林中适用于行道树和庭荫树，适应性及抗性强，它的花和坚果可作为黄色染料，也可入药[1].花粉活力是花粉质量的重要生理指标及评估花粉细胞活性的依据之一，植物的受精与花粉的萌发率有十分重要的作用，细胞学实验和杂交育种的成败与花粉活力有关[2].花粉是植物种质的主要形式，它在有性繁殖中发挥着重要作用。不同种质间的花期不同，为了能更好地利用花粉，要对花粉进行不同条件的保存以延长花粉的寿命[3].研究花粉保存条件，可以解决制种中花期不同的问题

2、[4],可以使植物在不同的花期进行授粉杂交，还可以使不在同一地点的植物进行杂交授粉，重要的是能延长花粉的寿命[5].木本植物种质资源保存的重要方法之一是花粉的保存，花粉保存也是开展人工杂交的重要技术环节。　　花粉的寿命很短，为了在较长时间内保持花粉的生活力，需要花粉在特殊条件下进行保存。贮存花粉的方法有很多，但不同植物的花粉对贮存条件的要求也不相同[6].番茄花粉在低温下，花粉寿命延长，且花粉有相对高的存活率；雪松花粉在冰箱冷藏室保存数年，其花粉依然具有较高的存活率；而鹅掌楸花粉不宜贮藏在4℃条件下[7].就目前对国槐花粉的研究而言，仅限于花粉形态学方面的研究，如赵燕等[3]

3、对其花粉的形态进行了比较，杨德奎等[5]对山东槐属植物的花粉亚显微形态进行研究，而对花粉保存方法及活力的研究很少报道。　　笔者以国槐花粉为材料，研究其在不同培养基上萌发情况及花粉的萌发时间，讨论花粉在不同浓度的蔗糖和硼酸条件下的萌发情况，确定适合花粉保存的方法，旨在为研究槐属植物的杂交育种提供参考依据。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　在山东省林业科学研究院收集处于盛花期的国槐花粉。实验于2014年7月在山东省林业科学研究院实验室进行。琼脂、蔗糖生产于Biotopped公司，硼酸由河南焦作市化工三厂生产，显微镜由北京泰克仪器有限公司制造。　　1.2实验方法　　1.2.1花

4、粉的采集及处理选择当天盛开的花朵，将花粉磕到硫酸纸上，包好，放在剩有干燥剂的干燥器中分别放于室温（27℃左右）和冰箱冷藏室（4℃），保存待用。　　1.2.2培养基配方采用琼脂培养基萌发法。按照蔗糖、琼脂、硼酸浓度设计6种培养基，配方如表1所示。　　1.2.3萌发时间的测定将培养基滴于载玻片上并铺展开，将花粉粒均匀散在凝固的培养基上，每种培养基上的花粉量应保持大致相同，放置于25℃培养箱中培养，每隔10min拿到光学显微镜下观察，每个处理3个重复，每个重复随机观察5个视野，以确定花粉萌发时间。　　1.2.4花粉萌发率的测定按照1.2.3中的方法进行花粉培养，萌发60min后，拿

5、到光学显微镜下观察，每个处理3个重复，每个重复随机观察5个视野，观察花粉的萌发情况。选择花粉萌发率，计算见式（1），最高的培养基用作下一步实验。　　花粉萌发率=（萌发花粉粒数目/观察的总花粉粒）100%（1）1.2.5花粉保存方法的确定每天在相同的时间将保存备用的花粉进行培养，萌发60min后，拿到光学显微镜下观察花粉的萌发情况，每个处理3个重复，每个重复随机观察5个视野，直至花粉不再萌发。对比统计的2组数据，以确定于花粉的保存方法。共2页:12　　2结果与分析　　2.1培养基法测定花粉管生长时间　　花粉管的生长需要一定的时间，在2号培养基上培养不同时间，放到40倍显微镜下观

6、察花粉管的生长，情况如图1所示。培养40min时花粉刚萌发如图1A;培养60min时花粉管萌发如图1B（此时花粉管的长度约为花粉粒的3倍）；培养90min花粉管基本停止生长如图1C,此时花粉管的长度约为培养60min时的2倍。　　2.2不同培养基对花粉萌发率的影响　　影响花粉萌发的重要原因有蔗糖和硼酸[8].蔗糖不仅为花粉萌发和花粉管的生长提供营养和所需要的碳源，还能帮助花粉维持外界环境一定的渗透压[9].　　花粉培养基的主要成分是硼酸，硼酸不仅能增加花粉对糖的吸收、运转和代谢，增加氧的吸收，还能促进花粉的萌发和花粉管的伸长[10].硼酸与糖结合不仅提高了花粉管的萌发率，还促

7、进了果胶的合成[11].笔者设计了6个培养基配方，实验结果显示花粉在6种培养基上全部萌发，10倍显微镜下观察萌发情况，如图2.统计花粉萌发率结果如表2所示，通过对①号培养基与④号培养基、②号培养基与⑤号培养基、③号培养基与⑥号培养基的花粉萌发率观察硼酸对花粉萌发的作用，由3组对比可以看出100mg/L的硼酸比10mg/L的硼酸花粉萌发率高。由①号与②号、④号与⑤号2组培养基可以看出蔗糖对花粉萌发的影响：5g比0.5g蔗糖花粉萌发率高。由②号与③号、⑤号与⑥号2组培养基可以看出琼脂对于花粉萌发的影响：1g