化学化工学院教案所属系化工制药系

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1、化学化工学院教案所属系：化工制药系教师姓名：职称：植物化学实验电子教案教材：化工制药系主编植物化学实验讲义实验七齐墩果酸的提取、分离及鉴定1、掌握三萜皂苷元的提取、分离和鉴定技术，熟悉三萜皂苷的性质。2、掌握两相溶剂水解方法。一、实验目的二、实验原理根据女贞子中齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用酸水解，氯仿萃取同步法提取齐墩果酸。齐墩果酸是一种广谱抗变态反应药，对I、II型变态反应均有抑制作用。它又是一种良好的免疫调节剂，具有抑制肿瘤，降低转氨酶，防治肝炎、肝硬化，降血糖，升白细胞

2、和增强机体免疫功能等功效。齐墩果酸属五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，已报道其以游离态、酯、苷或兼有的形式存在于150多种植物中而多数是以苷的形式存在。但含齐墩果酸的量超过10％的甚少。从刺五加、龙牙楤木中提得率超过10％，纯度达95％以上，是理想的药用资源。女贞子为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit．的干燥成熟果实。为常用的扶正固本中药。药理研究表明其促进免疫的主要有效成分为齐墩果酸、熊果酸及乙酰齐墩果酸。齐墩果酸以游离态和结合成苷的形式同存于女贞子中。经检测发现其齐墩果酸含

3、量以幼果期（8月）含量最高，可达8.04％，随着发育成熟下降到2.5％左右。其在果实中的含量分布为外中果皮>全果实>内果皮>种仁。女贞子还含橄榄苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蜡等。女贞子中主要有效成分：（1）齐墩果酸（oleanolicacid）：C30H48O3，白色针状结晶（95％乙醇），mp305～306℃。可溶于热甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水。（2）熊果酸（ursolicacid）：C30H48O3，白色针状结晶（95％乙醇），mp286～287℃。易溶于二氧六环、吡啶。可溶于

4、热乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水。（3）乙酰齐墩果酸（acetyloleanolicacid）：C32H50O5，白色簇晶。Mp258℃～260℃。溶于氯仿、乙醚、无水乙醇，不溶于水。三、实验步骤称取女贞子果皮粗粉50g，置于圆底烧瓶内，加15％盐酸溶液350ml，氯仿250ml，70℃水浴回流水解2h，过滤，分取氯仿提取液（用水洗至中性，用无水硫酸钠脱水干燥、过滤）另存。药渣用水洗至中性，抽干，干燥药渣至含水量小于10％。将干燥药渣置于圆底烧瓶内，加氯仿250ml回流1h，合并二次氯仿提取

5、液，取出2ml留待薄层鉴识，其余减压回收氯仿至糖浆状，趁热转移至烧杯中，冷后成半固状物。（1）提取（2）分离与精制方法1：取上述半固状物，以少量苯洗涤．除去脂溶性较大的成分，即有固体析出，抽干，得浅黄色析出物。用1:100倍量（W／V）95％乙醇回流10min，过滤，滤液浓缩至小体积，放置，析出粗晶，抽滤得齐墩果酸粗品。反复用90％乙醇重结晶，可得较纯的齐墩果酸。方法2：同方法1用苯处理得浅黄色析出物，加10倍量5%氢氧化钠溶液煮沸10min，放冷后抽滤，适量热水洗涤1～2次，抽干得类白色析出物，

6、用95％乙醇回流溶解，趁热过滤，盐酸调至pHl～2，放置析晶。抽滤得齐墩果酸粗品，用正己烷-乙醇（1:1）重结晶，可得较纯的齐墩果酸。（3）鉴定a．呈色反应取齐墩果酸少许置试管中，加醋酐lml，使溶解后，沿试管壁加硫酸数滴，在两液层交界处，出现紫红色环。b．薄层色谱鉴别薄层板：硅胶G-CMG-Na板点样：女贞子氯仿提取液、自制齐墩果酸乙醇溶液、齐墩果酸对照品乙醇溶液（1mg/ml）。展开剂：氯仿-丙酮（95:5）、环己烷-乙酸乙酯（8:2）任选一种。显色：喷10%硫酸甲醇溶液，105℃烘至显色，日

7、光和紫外光灯（365nm）下检识。观察记录：记录图谱及斑点颜色。四、思考题女贞子中齐墩果酸的含量因采收季节、产地不同有差别吗，可根据原料含量酌增取材吗？